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标题:【求助】请问SDS-PAGE胶，制胶时浓缩胶不凝固是怎么回事啊？

wmp1234[使用道具]
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发表于 2014-6-4 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我浓缩胶3％4%的都配过，药品是一块配的，分离胶很好，浓缩胶就是不凝。我也发现ap固体有潮解的现象，但是分离胶好使为啥浓缩胶就不好了呢？固体ap潮解得影响到底有多大？谢谢各位大侠
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2014-6-4 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、page胶凝结过程不同于琼脂糖胶，它是一种化学反应过程，较低的温度下凝固的慢。
2、浓缩胶由于浓度较低，所以一定要比分离胶加更多的AP和TEMED，分子克隆上的浓度就可以了。
3、有时候凝结，有时候不凝结，可能就要考虑另外一个因素了，就是溶解在page溶液中的氧气。氧气抑制PAGE 胶凝集，所以，你可以在配好溶液后，进行短暂的真空抽气，以排除溶解在溶液中的氧。
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98776langtao[使用道具]
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发表于 2014-6-4 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你在制备丙烯酰胺溶液时是否既加入了丙烯酰胺也加入了双丙烯酰胺?我也出现过浓缩胶凝不了的问题,就是忘加了双丙烯酰胺
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30moonriver[使用道具]
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发表于 2014-6-4 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

首先，可能是温度的问题，温度对胶的凝固影响很大，37度左右比较容易凝固，温度太低比较难凝固，你可以通过TEMED的量来调节一下，就是比温度高时多加点TEMED；
另外，也可能是氧的影响，当有氧气存在的条件下很难凝固，而浓缩胶本身浓度比较小，更难凝，检查一下你的梳子两边是不是完好的，如果损坏可能会有空气进入，插梳子时要按的紧一点，防止氧气的影响；
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2014-6-4 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
积层胶与分离胶配置是唯一的区别在于所用的TRIS-HCL不同，检查一下两种TRIS-HCL又没有问题啊
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PCR[使用道具]
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发表于 2014-6-4 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

浓缩胶不凝，因为 浓缩胶的ACRBIS 的量明显少于分离胶，出现胶不凝的现象个人 认为与 TRIS 的关系不大，可能有几种可能：
1、ACR 及BIS 有无问题，检查确认，一般不要用太久的，放置太久明显影响凝结的速度，胶凝结的原理是通过 APS及TEMED 促进前两者的聚合，如前者出现问题，当然不凝了
2、最可能出现问题的地方，现在TEMED 一般都是液体，出售，一般只要还能闻到刺鼻的味道，应该没问题；但APS 很易出问题，一般建议APS 现配现用，一般我们1周配一次，避光4度保存即可，且鉴别APS 是否失效，在配置时如加水溶解时听到此次的声音，一般APS 没有问题，如一周没用完，不要舍不得丢弃，需要重配。
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=菓子=[使用道具]
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发表于 2014-6-4 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的AP都变成块状的了，Sigma的，刚才把他们用小勺弄碎，挖了点放了点水试验了一下，可以听到吱吱声，哈哈。
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