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标题:【求助】帮忙分析血浆2D图

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发表于 2014-6-4 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】帮忙分析血浆2D图


血浆2D图
12％的胶
一向设定110000伏
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发表于 2014-6-4 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

110000V?!?!!
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发表于 2014-6-4 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上样量是多少,感觉聚焦不好,而且上样量不够,应该是没有除白蛋白和免疫球蛋白的,图上这两种蛋白都有出现.
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发表于 2014-6-4 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

110000V？？
你的等电聚焦仪也太牛了！！
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发表于 2014-6-4 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上样量是多少,感觉聚焦不好,而且上样量不够,应该是没有除白蛋白和免疫球蛋白的,图上这两种蛋白都有出现.

======================================================

上样600ug，24cm胶条，主要问题是点的后部连成线，没有明显的点
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 小中大

是11万V小时
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 小中大

如果是这样,你的图应该是考染了,我开始以为是银染所以觉得上样量小了.本人觉得血清蛋白如果不去白蛋白和免疫球蛋白不适合做考染,因为血清中这两种蛋白含量在55%以上,很明显你这么高的上样量,这两种蛋白至少占了300ug,直接的后果是在第一向时堵塞了胶的孔道,以至于整个结果是几根线,尤其是50000kd和30000kd(免疫球蛋白的轻重链,还有白蛋白),建议换成200ug,56000vhr,银染.个人意见,仅供参考,希望有效Smile
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发表于 2014-6-4 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我以前也是这样做的，点就很明显，这次一直找不到原因，我怀疑是否Tris-Hcl8.8调得不准，我是用PH试纸调的。最近重新做了Tris-Hcl，效果稍好，可是点的后部仍连成线，不知何因？
另外我是做差异蛋白组，担心步骤多了，可靠性降低，故未去高丰度蛋白。听说agilent的柱子除高丰度蛋白的效果不错，可这个方法不适合做2－D电泳，不知是否真实
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发表于 2014-6-4 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的agilent的柱子除高丰度蛋白
血浆100ug,银染


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2014-6-4 17:41
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hold住[使用道具]
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发表于 2014-6-4 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

嗯,你的考虑是对的,用柱子能去掉高峰度蛋白,但是要考虑到非特意性拉掉其他蛋白
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