小中大谢谢各位。
蛋白上没有别的标签。
二聚体的话在8M Urea 溶解，再加上还原性SDS-PAGE电泳不可能打不开吧。
我是刚到的另一个实验室，以前我有纯化天然组织中的蛋白的经验。这个实验室其他人没有蛋白纯化的经验。所以我就接手他们构建的载体往下做。以前他们只是用镍柱粗糙的纯化一下，因为有很多杂带，他们还一直想当然的那个20kDa的蛋白就是目的蛋白。并且他们用很不纯的蛋白样品（其中包括40那条)做了多抗，抗体的效果看起来还不错。我开始纯化的的时候也是想当然的以为那个20kDa 的蛋白就是。浪费了两个星期之后我发现，那条20kDa的蛋白在镍柱上的结合力还没有40和80的强。改变binding buffer后那条20的蛋白就没有了。郁闷几天之后，我找到了anti-his的抗体，WB结果以出来发现搞错蛋白了。
呵呵，蛋白确实很有趣，不象DNA那么循规蹈矩。写出这个折腾了两个星期的教训供其他站友借鉴。
我已经决定继续钻这个牛角尖了，1，试试其他的电泳缓冲系统，看表观分子量是多少2，把可溶的纯化出来，用分子筛测测分子量； 3，用MS的方法看看分子量。4，检查别人构建的这个质粒。
