【求助】为什么PVDF膜全膜都发光？

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标题:【求助】为什么PVDF膜全膜都发光？

fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-6-5 17:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

昨天我在做WB时，PVDF膜加发光试剂后，大概5分钟左右在暗室观察膜出现了全膜发光的现象，
条件：5%BSA/TBS封闭过夜
一抗1：10000，室温6h
二抗1：2500，室温2h
一二抗后都用TBS洗3次，每次10分钟。
不知那步出了问题？请各位多多帮忙，谢谢！

DONT[使用道具]
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发表于 2014-6-5 17:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

感觉好像是洗的时候出的问题，加0.2％的吐温20试试，也就是用TBST洗。

glass[使用道具]
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发表于 2014-6-5 17:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

二抗1：2500浓度太高了吧，我们一般1：5000——1：10000

987789[使用道具]
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发表于 2014-6-5 17:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可能：
1.封闭得不好
2.二抗浓度太高
3.暴光时间太长

mimili_901[使用道具]
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发表于 2014-6-5 17:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

应该用TBST洗吧！

fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-6-5 17:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

首先是二抗浓度太高了，普通的二抗的话1：10000就好拉，尤其是鼠抗什么的。。。
洗最好也用TBST洗。。。

tuuu2[使用道具]
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发表于 2014-6-5 17:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

要检查是不是一抗，二抗或洗膜是否出了问题，你可以将你的膜洗一下，用ＤＡＢ显一下色，看看有没有，如果你的目的带有，说明前面的操作没有问题；那就要考虑发光剂的问题了，你买的是不是增强型的啊，增强型的发光剂比普通型的一是发光作用强，二是淬灭时间也延长，所以如果留在膜上的试剂太多的话，容易出现这种情况，可用滤纸轻轻的吸一下（从膜的边缘），或拿起膜轻轻的摔一下试试。

Ao7[使用道具]
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发表于 2014-6-5 17:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

一抗和二抗浓度都太高；冲洗缓冲液最好也用封闭缓冲液进行。效果可能会好。