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标题:【求助】50Kd蛋白做western的条件

zranqi_1[使用道具]
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发表于 2014-6-7 09:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】50Kd蛋白做western的条件


最近要做一种动物蛋白的western,分子量150左右,电泳是用迷你胶,电转用湿转,不知谁做过差不多分子量的蛋白,交流一下啊.
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2014-6-7 09:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

湿转可用恒流100mA，2－3小时。具体可转几次marker看看
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-6-7 09:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做过220KD的,开始要摸条件.我是用100V的恒压,转了9个半小时,才转到膜上.但是在150以下的蛋白好象就已经转过了.
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nn255[使用道具]
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发表于 2014-6-7 09:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做parp，分子量是116KD，转膜条件是：湿转，80V，3小时，转的很好
你可参考下，估计80V，4小时就够了
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2014-6-7 09:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位,浓缩胶和分离胶的配方能说来参考一下吗
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2014-6-7 09:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不同比例的浓缩胶有不同的配方，相同比例不同总体积的浓缩胶的配方也不同，具体有参考《分子克隆学实验指南》，现在已有第三版的中文版。150Kd蛋白western配方推荐如下，希望对你有所帮助。8％Tris－甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳总体积为10ml的浓缩胶的配方：水4.6ml，30％丙烯酰胺溶液32.7ml，1.5mol/L Tris（PH 8.8)2.5ml，10％SDS 0.1ml，10％过硫酸铵0.1ml，TEMED 0.006ml。
Tris－甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳5％分离胶4ml配方：水2.7ml，30％丙烯酰胺溶液0.67ml，1.0mol/L Tris（PH 6.8) 0.5ml，10％SDS 0.04ml，10％过硫酸铵 0.04ml，TEMED 0.004ml。
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2014-6-7 09:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有没有更好的啊，我想用7。5%和4%的胶跑，不知谁能说下配方
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-6-7 09:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
7.5％Tris－甘氨酸SDS-PAGE电泳总体积为10ml的浓缩胶的配方：水3.5ml，30％丙烯酰胺2.5ml，1MTris（PH 8.8）3.8ml，10％SDS 0.1ml，10％过硫酸铵0.1ml，TEMED 0.008ml。
5％分离胶4ml配方：水2.7ml，30％丙烯酰胺0.67ml，1.0M Tris（PH 6.8) 0.5ml，10％SDS 0.04ml，10％过硫酸铵 0.04ml，TEMED 0.004ml。
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-6-7 10:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做120KD蛋白就用这个条件，很多文献也都采用这个，你可以先试试看
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JK.jon[使用道具]
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发表于 2014-6-7 10:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的目标蛋白有155kd,用分离胶10%和浓缩胶5%,湿转70v,4个小时,效果不错
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