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标题:【求助】电泳时带怎么是弯的啊?

IAM007[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】电泳时带怎么是弯的啊?

我做的是醇溶蛋白酸性电泳,居然出现了奇怪的现象:
我用400伏电泳,刚开始电泳没几分钟带就开始变弯.而且很难看,有的都呈波浪型了,不知道是什么原因?
刚开始电泳时,电泳仪上显示的电流比较大,然后电流开始慢慢减小,是隔几分钟减1毫安,一直到稳定的电流就不在变了.我想知道为什么电流会变啊?(缓冲液是新的,线也是好的啊)难道是电泳仪的问题?
请朋友们指点一下,谢谢!
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xue258[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果电泳带是弯的，有可能是你的胶做的不够均匀，配胶时尽量摇匀。
另外，电泳的电流是会变小的，如果我用80伏跑，刚开始可能15毫安左右，慢慢就会降下来到10或10以下，都是正常现象。
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dog002[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

支持楼上的意见
很可能是胶的原因，没有充分混匀。
同时还要看看电泳线是不是直的，从而造成电强不均一。
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hold住[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、凝胶聚合不均匀，灌胶时候尽量混合均匀，动作轻缓
2、拔梳子要迅速，清洗加样孔要小心，以免把上样带扭曲
3、样品盐浓度过高会挤压其他条带导致宽窄不一，纯化样品，调整盐浓度
4、胶板底部有气泡会影响电泳效果，应赶走气泡。同时注意电泳槽装置是否合适
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tie8[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电泳缓冲液，配胶的缓冲液的PH值不正确的话，条带就不好
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greenbee[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人觉得是电泳的电压过高,导致电流过大,局部受热不均匀引起的蛋白带畸变,电泳的电压一般在200v左右即可.若是恒流跑.电流可以设在15-30mA.
同时要有良好的冷却系统,维持电泳环境在4℃左右,可以借助冰箱的保鲜层.
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yhz1973[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有上样量每个孔里不要相差太远,至少要平衡,不然也有可能跑出来是弯的.
我也认为应该放在冰上跑,另外把电泳液在跑前冰一下.
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IAM007[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我今天400伏预电泳了几分钟，结果没有弯。
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发表于 2014-6-8 11:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
调低样品盐浓度，看看是不是还会弯
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发表于 2014-6-8 11:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也出现过类似的情况，可能是因为胶没配匀．或是加样孔空的太多．
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