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标题:【求助】western免疫反映后显色问题

yychen[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】western免疫反映后显色问题


我看的文献讲的是用斑点免疫印记法测羊水中SP－A的方法，它最后说“当BCIP/NBT显色达到要求后，用终止液终止反应。将NC膜在扫描计上扫描，通过标准品算出各样品含量。”
这个“将NC膜在扫描计上扫描”中所提到的扫描计是一般扫描所用的那种仪器么，还是特定的什么东西啊？
请大家帮帮我吧。
谢谢！
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yychen[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有一个问题，就是，我做斑点免疫印记，我看文献上所用的显色都是BCIP/NBT，不知道能不能用化学发光法呢，这个在显色这一块，跟western blot有什么不同的地方呢？
还有就是能不能二抗用辣根过氧化物酶，然后显色用DBA，跟前面想比的话，哪种更好呢，各有什么优缺点呢？
哪位高手不吝赐教，小妹这里感激不尽，多谢了！
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

扫描用普通的扫描仪就可
个人体会，AP法BCIP/NBT显色背景颜色较淡，而DAB 显色背景较重，我觉得还是BCIP/NBT好，ECL 法虽然比前面两种方法都敏感，但你这种我觉得没有必要那样，太麻烦了，还要压片曝光，用普通的显色就行了。
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remenb[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

2D用的扫描仪可以，安玛西娅有卖的，不待软件大约3w RMB
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

普通扫描后用 quantity one 一样的
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yychen[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
普通扫描后用 quantity one 一样的
这个quantity one 是什么意思啊，要怎么做呢？
还有个问题不懂，就是点样是直接把羊水点在NC膜上，还是需要别的什么处理呢？我看到有的地方写要把样品稀释成几倍几倍的那样，这样做是什么意思呢？有没必要这样做呢？
还有就是在NC膜上点样，画格子，有什么要求么，大约画多宽多长呢？
NC膜可以单张买么，哪里可以单张买呢？再就是，我现在有10份标本，需要几张NC膜呢？
关于杂交袋的问题，可以去哪里买么？
谢谢先了！
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

quantity one 是个软件，用于定量电泳的OD，可在园子里搜索下，很多
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yychen[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不过，别的问题谁来回答我呀。等待中！！
还有个问题不懂，就是点样是直接把羊水点在NC膜上，还是需要别的什么处理呢？我看到有的地方写要把样品稀释成几倍几倍的那样，这样做是什么意思呢？有没必要这样做呢？
还有就是在NC膜上点样，画格子，有什么要求么，大约画多宽多长呢？
NC膜可以单张买么，哪里可以单张买呢？再就是，我现在有10份标本，需要几张NC膜呢？
关于杂交袋的问题，可以去哪里买么？
谢谢先了！
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