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标题:【求助】SDS-page

docsy[使用道具]
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发表于 2014-6-8 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-page

我的SDS-page时好时坏，这是昨天天的胶。我用5％的浓缩胶，12％的分离胶。目的蛋白分子量17KD。5％的浓缩胶用80V，12％的分离胶160V的电压跑。到了胶下1/3处条带不清楚，溴酚蓝跑完后停止电泳，染色后就成了这样。今天又跑了一次，但是条带都很模糊，在没加样的泳道也被蓝然，蛋白maker条带也不清楚，请大家分析一下是什么原因。
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docsy[使用道具]
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 小中大
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发表于 2014-6-8 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1. 未加样涌道蓝染估计是加样时漏到旁边涌道了，
2. 检查一下缓冲体系的PH值，主要是配胶的tris-HCL，电极缓冲液。同时要确定你的样品中盐离子的浓度不能过高。
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 小中大

建议降低一点电压。到140V即可。同意楼上，也要检查一下缓冲液的PH。
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发表于 2014-6-8 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

缓冲液的PH应该在多少范围比较合适??谢谢!!
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发表于 2014-6-8 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得是你的胶还没有完全成形的原因。然后电压可能高了一点，产生的热量容易使样品扩散。
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发表于 2014-6-8 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1、楼主的电压太高了，你的蛋白分子量很小个人建议分离胶100V 足够了，过高热量多易弥散，还有就是你要尽量缩短上样的时间，如上样太久，也会造成样品的弥散，上样时因尽量避免溢到旁边泳道，你的胶一定要凝充分，不然会残留未凝的胶在样品孔低，减少了上样量，注意拔完梳子后要用缓冲液将上样孔冲下
2、其他确保你的TRIS PH 值、缓冲液最好用新鲜的，增加上样量
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