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标题:【求助】跑1D SDS－PAGE后可以直接做质谱分析吗？

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发表于 2014-6-8 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】跑1D SDS－PAGE后可以直接做质谱分析吗？


大家好：我做的是植物的蛋白质，把蛋白质提取液直接进行SDS－PAGE，电泳后发现不同时期的有差异蛋白带，我想问一下能直接把这条差异带切下来送去做质谱分析吗？我用的是考染。
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huifeng0516[使用道具]
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发表于 2014-6-8 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以,酶切后用 ESI-MS/MS 或MALDI-TOF-TOF测出序列,
如果只是用MALDI-TOF ms的话会有些问题
同样的情况
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=6768724&sty=1')
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 小中大

酶切怎么做啊？在实验室能做吗？需要什么特殊的仪器吗？可以自己不做酶切，直接拿到做 质谱的地方能给做酶切吗？
我不了解这方面，关于酶切的做法能否介绍的详细些！谢谢！
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 小中大

你可以拿到专门做质谱的地方，一般都是用胰蛋白酶酶切的！
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发表于 2014-6-8 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在哈尔滨有能做质谱的地方吗？
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发表于 2014-6-8 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果你的差异蛋白数量多，附近又有质谱仪可用，你可以考虑自己做酶切，不过所需的试剂要求很高，最好都是进口的。否则送到专门做质谱的地方去吧，附件是常用的蛋白质酶切PROTOCOL。
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发表于 2014-6-8 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果直接送去质谱，那目的蛋白带切下来后需要怎么保存啊？
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发表于 2014-6-8 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有，听说1D的一条蛋白带可能好有好几个多肽，那质谱出来的是哪个啊？怎么能把1D中单条带中的多肽再分开啊？
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发表于 2014-6-8 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果直接送去质谱，那目的蛋白带切下来后需要怎么保存啊？

=====================================

短时间保存，放在装有纯净水的ep管中就可以
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 小中大


QUOTE:
原帖由 =pkchen= 于 2014-6-8 17:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

还有，听说1D的一条蛋白带可能好有好几个多肽，那质谱出来的是哪个啊？怎么能把1D中单条带中的多肽再分开啊？


应该说1D的一条蛋白带可能好有好几个蛋白质，每个蛋白质酶解后会有很多个多肽。质谱会给你个list，因为它本身就是个mixture。
1d的蛋白质进行分离，可以做2D~
建议看看相关的专业书籍。
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