蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】WESTERN的问题？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】WESTERN的问题？

079777chao[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107992
精华 0
积分 321
帖子 301
信誉分 100
可用分 2371
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
1

发表于 2014-6-8 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】WESTERN的问题？


蛋白质电泳上样前为什么要加热变性 (变性胶)？ 是否所有的蛋白质都需要加热变性？ 哪类蛋白质不需要加热变性？ 不加热变性和加热变性显影后有什么区别？ 多高的温度比较合适
顶部
xiaoxiaoniao[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 108878
精华 0
积分 509
帖子 677
信誉分 100
可用分 4049
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-5-15
状态 离线
2

发表于 2014-6-8 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

详情参见分子克隆实验指南
简单的说，变性是为了使得蛋白质在电泳时的分离只与它们的分子量有关。
我知道的蛋白质电泳前都要变性，我一般用95-100度来变性，15分钟
顶部
bring[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74282
精华 0
积分 597
帖子 914
信誉分 100
可用分 5326
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-9
状态 离线
3

发表于 2014-6-8 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
变性是为了让蛋白和SDS结合，这样所以得蛋白都带上了同样的负电荷，让电泳迁移只和蛋白的分子量有关，这样才能利用分离胶分离出不同大小的蛋白，一般变性的温度100度5分钟左右
顶部
8princess8[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75310
精华 1
积分 664
帖子 821
信誉分 103
可用分 5056
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
4

发表于 2014-6-8 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

弱弱地问一句：变性后为何抗体还能与之结合？我是指后继的检测！
一直没有搞明白！
顶部
831226[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79782
精华 0
积分 770
帖子 1240
信誉分 100
可用分 6976
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
5

发表于 2014-6-8 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
变性应该是把蛋白的二、三级结构破坏了，但是不会破坏蛋白的一级结构。
抗体识别的是蛋白上的特异片断，或者氨基酸。
所以蛋白变性后还能和抗体结合
顶部
8princess8[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75310
精华 1
积分 664
帖子 821
信誉分 103
可用分 5056
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
6

发表于 2014-6-8 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
也就是说，一抗用的是针对线性片段 的抗 体。不是那种针对空间结构的？
顶部
831226[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79782
精华 0
积分 770
帖子 1240
信誉分 100
可用分 6976
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
7

发表于 2014-6-8 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是的
顶部
04906[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73544
精华 0
积分 599
帖子 858
信誉分 100
可用分 5155
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
8

发表于 2014-6-8 17:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想请教一下关于WB具体流程以及原理的介绍资料，

在此将不胜感激!
顶部
9900[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75149
精华 0
积分 399
帖子 478
信誉分 100
可用分 3216
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
9

发表于 2014-6-8 17:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对于为什么要变性各楼已经解释很清楚了
这里回答另外 的问题。
并不是所有的蛋白都要变性，看你的要求，也有非变性的sds－page
非变性的蛋白电泳，蛋白迁移率还跟蛋白质形状有关，而变性后只与大小有关，某些蛋白质，变性后电泳跟非变性电泳比起来，条带少了，因为变性后同样一级结构的蛋白电泳时就没有差别了。
变性以后，二级，三级，四级结构改变，但是一级结构不会改变，抗原的表位还在，可以被抗体识别，一样有免疫原性。
顶部