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标题:【求助】SDS-PAGE 浓缩胶和分离胶分界处总是容易断开?

idea2011[使用道具]
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发表于 2014-6-8 17:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE 浓缩胶和分离胶分界处总是容易断开?


我配分离胶30min待胶凝后,将水倒出,并用水冲掉未聚合的丙西先胺,用力甩掉水层,加入浓缩胶,凝结后几小时之内分界处还正常,但过夜后,就会发现交界处有裂缝出现.电泳结束后,浓缩胶一碰就与分离胶脱开.请问这是怎么回事呢?
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98776langtao[使用道具]
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发表于 2014-6-8 17:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

分离胶浓度较高，浓缩胶浓度较低，不影响电泳结果。胶放置过夜，要用电极缓冲液浸泡
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98776langtao[使用道具]
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发表于 2014-6-8 18:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

实在是查不到结果 只好请教各位几个问题 不胜感谢
(1)Ig Y抗体的四个亚型分子量差别有多大呢?
(2)利用聚丙烯酰胺凝胶电泳能够分开蛇毒Ig Y抗体的四个亚型么?
(3)从鸡卵黄中提取的蛇毒抗体分子提纯过程有可能损失什么片段么,如果有哪个部位容易变化?
（4）蛇毒抗原抗体交叉免疫,其蛋白条带是否与抗原成分有直接关系?
（5）蛇毒抗原有多种成分,其免疫出的Ig Y 抗体的亚型比例与抗原类型有直接关系么?
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hold住[使用道具]
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发表于 2014-6-8 18:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我每次在灌浓缩胶前用PH6.8缓冲液即浓缩胶buffer洗一下，到掉，再用滤纸把气泡和到不掉的液体吸干净。
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jkobn[使用道具]
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发表于 2014-6-8 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是把封分离胶的水倒出，把玻璃板斜倒，用纸在外面把水吸干，就直接灌浓缩胶，一直都没什么问题。可能你甩得太干净，把过度的界面浓度分得太清楚了！所以时间一长就裂开！
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发表于 2014-6-8 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

TEMED少加一点可以防止胶收缩那么严重
另外放置过夜的话一定要保持湿润，我是用电泳buffer润湿，拿湿纱布包裹一下
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2014-6-8 18:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是把封分离胶的水倒出，把玻璃板斜倒，用纸在外面把水吸干，就直接灌浓缩胶，一直都没什么问题。可能你甩得太干净，把过度的界面浓度分得太清楚了！所以时间一长就裂开！

=============================================================================================================

非常同意。我 一般是把封分离胶的水倾掉，伸滤纸片到两层玻璃之间把残留的水吸干，随后立即灌积层胶，过夜（室温），没出现过裂开的现象
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duoduo[使用道具]
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发表于 2014-6-8 18:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我都是把分离胶上的水倒掉，用滤纸吸干，然后直接灌浓缩胶。一直挺好的。
过夜放置要泡在缓冲液中，不然胶会干的。我遇到过这种情况。
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kulee[使用道具]
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发表于 2014-6-8 18:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

过夜的话要胶保持湿润,我都是把胶泡在电泳缓冲液里的.胶干了就会收缩
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plaa[使用道具]
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发表于 2014-6-8 18:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如楼上说，降低浓缩胶的浓度。也就是适当增大水的比例。这样有利与浓缩胶和分离胶的结合，至少在胶制作阶段不会出现断裂。这在我的实验中已经验证了
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