小中大
A.同意箭头儿战友说的1。中 “瞬时尿素浓度降到最低我觉得并不是说马上就完成折叠的过程”,但此时不是“需要时间过度到复性中间体并最终复性成功的”,而是已经过渡到复性中间体,并且是复性后期中间体,所以我才会说是:“蛋白主体构象折叠的完成”, 当然这以后还需要继续放置一段时间让他缓慢折叠。
B.同意你的2。但实际上还是可以加点别的更加全面一点。
C. 我跟你讨论的是稀释复性时两种方法的比较问题(我的意见是不能肯定哪种方法更好,存在既有道理,不同的蛋白适合不同的方法,多一种方法总是多一条路)。至于您说的从0.4mg到0.1mg蛋白有没有复性好,那我就不得而知,具体的东西只有作了才知道,不是吗?至于您说的那还不如去作透析呢,是啊,也可以,我没有说不可以啊。我只是对稀释复性中两种不同的方法阐述我的意见。另透析复性其实只能在实验室作作,很难线性放大并规模生产。这一点对我们这种需要有点产出的行业来讲是很忌讳的。
以上纯属个人愚见,对于蛋白复性这块我所知有限,目前行业中流行的有透析、稀释和超滤复性法及最时髦的柱上复性。对于超滤复性法本人所知有限,一般都用于大规模生产,可惜我这个和尚太小,没有机会去个大庙见识一下如何如何。其他几个在实验室都是常作的,条件也都允许。所以经常也会有这样那样的顾虑,到底哪个方法更好,更实用呢?后来有机会结识了一位AMERSHAM的复性高手,交流之后还是达到了几点共识,实验室或者基因工程药厂作复性不管是研发还是生产,稀释复性还是最有效的。柱上复性自个儿玩玩还可以,要上生产太难,毕竟技术没有那么成熟(当然国内也有成功的范例。)
再次重申一下,以上纯属个人愚见,仅供参考。
蛋白复性仁者见仁,智者见智。
箭头儿:
战友如果有什么意见理念不同,可以回帖,
不过我将会保留自己的意见,这个贴子就到此为止,从我始自我终。
理念上的东西,难说,
实验作出来了比什么都强。有冒犯的地方,要见谅了,呵呵。