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标题:【求助】小肽的标记

hot_hot_hot[使用道具]
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【求助】小肽的标记


我是新手,欲标记一条六肽,不知是该选择荧光素还是生物素进行标记,希望能得到大家的帮助!
我所要标记的小肽是白蛋白吞饮受体蛋白的拮抗肽。
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ritou1985[使用道具]
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标记的后会影响小肽的功能吗?
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hot_hot_hot[使用道具]
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就是想挑选一个不影响小肽活性的标记物呀,有了解的吗?
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zwsyrt[使用道具]
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我觉得用荧光素比较好,因为一方面荧光素比生物素小,这样对于肽的构象影响小,更有利于保持肽的活性,另一方面,也是更重要的一方面,生物素标记后的肽有时可溶性较差,而荧光素本身为水溶性的,标记后,溶解性也较好
这些是我个人的体会,有不对的地方请大家批评指正,因为我个人在实验中也曾分别用生物素和荧光素标记肽,结果前者的溶解性就很差,十分让人头疼,当然这并不是绝对的,不同的肽有不同的特性
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你标记后做什么?我个人的体会用生物素也可以.你要先查一下这个肽是酸性的还是硷性的,不同的肽要求溶液的 ph值不一样.所以,溶解时要求注意溶液的ph值.另外,标记后应该对活性影响不大.因为,六个氨基酸的肽一般是直链,对构象影响不会太大.如果有环,可能会有一定影响.仅供参考!
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hot_hot_hot[使用道具]
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谢谢两位的答复,我作的是一个介导白蛋白吞饮的受体蛋白的拮抗肽,后期我该怎么来检测其结合到了正确的位置呢,从这个方面考虑的话,应该优先选择哪种标记更方便呢?我是新手,问题较多,呵呵!
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qhyu[使用道具]
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从这个方面考虑,两种方法都可以呀,只不过一个酶法显色,一个荧光观察不过我觉得荧光素标记的,若用DAPI复染核,照片会更好看一些吧,呵呵
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hot_hot_hot[使用道具]
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我要结合的受体蛋白是膜蛋白,DAPI复染核可能是用不了了,我关键是要在证明该拮抗肽结合在膜上之后再进一步证明是在该蛋白的某一片段上,有什么可行的方法吗?
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zwsyrt[使用道具]
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你复染了核,才可以更好地说明你的肽是结合在了膜上呀,而且若你的受体是介导蛋白内吞的话,它会不会也介导你的小肽内吞呢,就像转铁蛋白受体一样
后面一方面好像很难达到呢,你是要证明你的肽是与你的受体的某一段结合吗?
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hot_hot_hot[使用道具]
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我设计的小肽是一种膜蛋白的拮抗肽,而且是该膜蛋白某一功能片段的特异性拮抗肽,所以,我希望最好是能证明二者间的特异性结合,有类似的文献吗?
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