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标题:【求助】考马斯亮蓝g250和r250的区别在何处，为什么我用g25...

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 小中大

【求助】考马斯亮蓝g250和r250的区别在何处，为什么我用g25...

sds-page染色后什么也没有？蛋白用考马斯亮蓝检测od：0.522，染色液是靠马斯亮蓝g 250,脱色液用40%的甲醇，和冰乙酸，g250 和 r250的区别是？：）
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eric930[使用道具]
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发表于 2014-6-9 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
r250是染胶的，g250是作蛋白定量的 。不能混用啊 ！
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 小中大
自己看书明白了；不同的配方，不同的染色方法适合不同性质的蛋白质。郭孝君《蛋白质电泳技术》p64-65. Smile
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 小中大
嗬嗬，可是我刚才看书上说，g250也可以用来染色，对小肽染色备受青睐，常用的方法是2克g250溶解在1升蒸馏水中，再加1mol/l硫酸。搅拌3小时后过滤，此时溶液是棕色，在加220ml 10mol 氢氧化钠。最后加310ml 100%三氯醋酸，此时是蓝绿色，备用。。。。
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发表于 2014-6-9 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我两种方法都试过,都可以染色啊.而且感觉R-250染色背景不容易洗脱.
到是看了一篇文献,介绍了一种简易的染色方法,试了一下,开始觉得染色液太淡,怕染不出来,等过了一夜再来看，发现效果挺好的,大家可以试试
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 小中大

我用0.25%g-250，45%甲醇 ，10%冰醋酸染色4-5小时，染色后煮一会儿，背景不容易洗脱.然后再45%甲醇 ，10%冰醋酸组成的脱色液中脱色，还是很蓝，看不到带，我就怀疑是不是我的蛋白没有提出来？？：（
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发表于 2014-6-9 16:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道楼主所说的＂sds-page染色后什么也没有？＂什么意思！染完后看到mark 了吗？是连蓝色背景也没有以致白板一块呢，还是只是没有条带呢？如果是前者的话，我想可能是你的染液有问题，建议重配．如果是后者，这就可能问题多了，有可能是蛋白上样量的问题．建议重跑．
对于Ｇ250和Ｒ250的区别，附图可见（标出），只有一个SO3的差别．但是染色性质差别较大．前者蓝绿色，多用于小分子蛋白的染色，多用于TRICINE 胶的染色体．而Ｒ２５０，红绿色，多用于ＳＤＳ－ＰＡＧＥ胶的染色．对于Ｇ２５０的脱色液，我们常用１０％的乙酸．而Ｒ２５０的脱色液，我们常用甲醇：乙酸：水比例为４：１：５来洗脱！
　过去本人也犯过一个错误，用Ｒ２５０染了ＴＲＩＣＩＮＥ胶．着色浅，没有蛋白条带．是不是和你说的有些相似！
注：图来自蛋白质电泳实验技术，郭尧君
具体见８３页


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 小中大
染色的问题已经解决了，跑完后用r250 ,40%的甲醇，10%的冰醋酸作染色液。现在出现带了，但颜色很浅，我曾经也以为是上样量的问题，就加了30微升，可是还是很浅，背景已经是白色的了。（刚进实验，老师还没有给我买msker.Sad）
我做的是棉花的蛋白，提取其中的蛋白质的缓冲液是：0.1mol/l tirs-hcl 8.0(trs,vc,edta,甘油，巯基乙醇)，10000g离心30‘上样，是不是太简单了，提的蛋白杂质多了。
曾经用丙酮沉淀，但后面的溶解总是出问题，有大量的絮状，这些絮状沉淀中不知有多少蛋白有多少杂质？
请那位高手指点一二。：）
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发表于 2014-6-9 16:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

文献可以打开的啊. 我现在就一直用G250 染的.因为这个方法比较灵敏. 有一种叫: sliver-blue 的方法, 就是用G250染的,我觉得效果很好啊. 染过夜, 条带很清楚,而且背景淡,脱色也是用蒸馏水洗.
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土坷垃[使用道具]
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 小中大
sliver-blue的方法 是怎么配的呢？多谢了 ：）
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