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标题:【求助】小女子求教转膜问题

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发表于 2014-6-9 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

今天把转膜后的胶染色，发现只有大于97kd的蛋白剩下，其余都没有了，包括marker的其他带。而相同的样品我昨天做过电泳发现是有条带的，所以我也不知道为什么会没有转上。难道转过了，还是什么原因跑走了，很疑惑。febright所说100v电泳45min，效果好。可是衡流300ma我的电压都不达50v，虽然时间有1h。再说一下我转膜用的是biorad的湿转。
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发表于 2014-6-9 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般根据膜的大小确定转膜的条件，一般4乘6CM 的PVDF 膜，恒流350mA 70-80min ，恒压80-100V 90min .
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发表于 2014-6-9 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
今日重做转膜，上样量为37.5ug，100v，40min，发现42kd以上的条带较清楚，但小分子量仍然没有，拟加大上样量，减少时间，请各位参考，给出意见，谢谢
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发表于 2014-6-9 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我电压100v，调到电流模式看电流还不到300，甚者有些文献用24伏1h，他们的你目蛋白小，确实要多摸索转膜的条件，查查文献吧，也许你会找到解决方法，不能光靠论坛就能解决问题的，因为我们可能不是非常明确你的蛋白以及你实验室的实际情况。呵呵
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