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标题:【求助】SDS-PAGE配胶的问题

bananapeople[使用道具]
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【求助】SDS-PAGE配胶的问题


我在配胶时遇到这样的难题,就是每次拔梳子,梳子都会带下一部分加样孔的胶,从而破坏加样孔。不知道大家有没有遇到类似的情况。我是头一天晚上配好胶,然后将其放到四度过夜,第二天再拔梳子,跑胶。不知道是不是因为凝胶时,在室温放置时间太长导致上面加样孔外面的胶与梳子粘的太紧的原因。
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室温放置长应该不会导致这样,可能与你从4度拿出有关,如放在4度建议先拔梳子,另一般配胶都很快,不必前天配,越新鲜越好,还有拔梳子时要两手扶紧,匀速拔,不要两边晃,这样一般没问题。
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配胶的时候在室温配停好的,为什么要在4度?
都过夜了,拔梳子还带胶,恐怕是过硫酸铵有问题,用新鲜配置的应该就好了。过硫酸铵溶液在4度放一周左右(会缓慢分解)。或者你的丙烯酰胺有问题(时间太久了)。
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abc816[使用道具]
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放到4度过夜是因为第二天一早就可以开始加样跑胶了吧,这样一个上午就可以,不用耽搁中午的休息时间,我也经常这样头一天配好放4度过夜,呵呵。不过第二天拔梳子时没有出现楼主所说的问题啊,先拿出来让其恢复至室温,再小心的均匀用力,垂直拔出就可以了。
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bananapeople[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 abc816 于 2014-6-9 17:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

放到4度过夜是因为第二天一早就可以开始加样跑胶了吧,这样一个上午就可以,不用耽搁中午的休息时间,我也经常这样头一天配好放4度过夜,呵呵。不过第二天拔梳子时没有出现楼主所说的问题啊,先拿出来让其恢复至室温,再小心的 ...


请问,你的浓缩胶浓度是多大?我的是5.5%的,好多人都是提前一天配好胶,放到四度过夜,拔梳子也没有碰到我这种情况,我觉得很奇怪,不知道哪里出了问题。难道梳子的质量有好坏之分?
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shenkunjie[使用道具]
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梳子一定要洗干净,很多人可以把玻璃板洗得很亮,就是懒得好好洗梳子,残留的凝胶干燥以后坚硬难洗。
然后,使用之前,用无水乙醇擦拭玻璃板和梳子,静止晾干。
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配胶的时候量稍微大一些,就是说加了一部分还能剩下一部分,观察剩下的胶,凝好了再拔梳子。因为一般板里胶比剩下的凝的会快一些,剩下的凝好了,板里的一定好了。拔的时候要快,尽量是水平着拔出来。要是如果点样孔不整齐不好的话可以用点样的枪头小心的整理一下,去掉残胶或者带上去的胶。
最好是拔好梳子再放4度过夜。
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zhezhe[使用道具]
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你用塑料包好过夜就好了
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whitesheep[使用道具]
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室温放置一段时间,泡到缓冲液里拔。
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