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标题:【求助】SDS-PAGE 跑胶图像 不理想！

coolcool[使用道具]
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发表于 2014-6-9 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE 跑胶图像 不理想！

我的蛋白条带（详见附图）一直是只能够跑出上部分蛋白条带，预期的目的条带一直没有，大约34kda,好像上样量已经很大了，甬道的条带很深了已经！！蛋白MARKER也是一致成梯形出现！！从图像中可以看到的跑胶问题请各位大虾指点！！小弟亟盼！！


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2014-6-9 17:42
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发表于 2014-6-9 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

样品盐浓度太大就会这个样子，不知道你的样品是全细胞蛋白还是纯化的，怎么处理的？增大上样量不会使条带变清晰。
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-6-9 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

检查一下电泳缓冲液对不对
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 小中大

电泳缓冲液没问题，分离胶和浓缩胶的PH都没问题啊！？？？
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nvdabing[使用道具]
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 小中大
你的胶浓度是多少？34kda的蛋白用10%的胶就可以。你在配胶的时候是不是没混匀？
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发表于 2014-6-9 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的分离胶浓度是20%的,有点大但是对条带的影响应该不是很大巴?好像之影响跑胶的速度!!配胶的时候是充分混匀的啊!
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-6-9 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

样品上样前最好处理一下，煮沸几分钟后离心取上清使用。
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发表于 2014-6-9 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

重配电泳液,在4摄氏度电泳
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-6-9 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般电泳温度最好不要太低，因为SDS或尿素等在低温下析出，影响电泳结果。最好控制在十几到二十几度。普通的SDS－PAGE不用控温，室温即可。
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minran_1980[使用道具]
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发表于 2014-6-9 17:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.电泳缓冲液是不是重复利用了,每次最好用新的;
2.我觉得可能是染色,显色过程中出现了问题,你看你的胶除了Marker带,其他几乎都黑一片,我觉得即使跑胶不理想,分离不清楚,但也不至于胶全是黑的;
洗涤,染色过程中用的水应该是去离子水,
染色时,硝酸银量低一些,
显色的时候甲醛加少一点,慢慢显色;
3.Marker的量我觉得还可以低一点.
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