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标题:【求助】marker跑成这样是何原因,为何sds-PAGE下半部...

woshiduiyan[使用道具]
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【求助】marker跑成这样是何原因,为何sds-PAGE下半部...


marker跑成这样是何原因,为何sds-PAGE下半部分条带跑不清楚?


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rxcc33[使用道具]
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如果你的样品和marker是用同一样品缓冲液处理的话,就是你marker本身的问题了,因为样品跑得很好,这可排除是胶的问题.建议换另一批marker一试.
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babybabe[使用道具]
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我也出现了这种情况,不知是什么原因,所有的溶液重配了还是不行,都快两个月了,始终跑不出一张好的电泳图,我都快说tmd的了,有人说是阳极的原因,我检查过也没问题,只剩下样品的问题了,可是我以前处理的样品都没问题,一直到胶的下缘,条代都是清晰的,见鬼了!现在我正在改变处理样品的方法。有新情况会及时联系!
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xue258[使用道具]
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跑SDS-PAGE 带有一定的随机性,会有时跑的好,有时跑的差,所以需摸出一定的条件。当将一切条件稳定后,条带就会一直跑的很漂亮,而且,也不会再让人繁心了。
1. 从图上看出,你好象是做原核表达。如果是的话,我可以说你的蛋白表达没有问题,目的条带也很清楚,分开的层次还行。
2. 胶的配置问题
我不知道你的胶的配方,如果配方问题排除的话,那就是实验操作原因。
比如说:你的MARKER上样孔处是否排除了气泡,是否样品混合均匀。如果有气泡的话,影响MARKER的 分辨率。
3.加样量
很明显,你的第二个MARKER 加样时已经漫出加样孔了,所以会有波浪形。
4.MARKER有拖尾现象,考虑胶的配置问题,电压高低。
5.我在做的时候,蛋白MARKER的最下面两条带一直很模糊,具体的原因我也在考虑中,可能原因是MARKER 降解了(它也是蛋白质啊)
呵呵!大家一起来讨论啊!
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qianqin1977[使用道具]
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你灌胶之前是否把玻璃板洗干净了(也许玻璃板不干净导致胶灌的不均匀), 我每次都用洗涤剂把玻璃板洗干净,后用95%酒精擦拭,晾干。
你的marker是不需要处理直接上样的吗?也许marker时间久了,成分有变化。
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woshiduiyan[使用道具]
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谢谢各位的建议,我的玻璃板只是用洗手液清洗后用超纯水冲洗,晾干的。也很干净,应该不是这方面的原因吧。
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1. stacking gel 的浓度是否过高?4%试试。
2. 电压过高?100V,40mA.
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dog002[使用道具]
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1.同意楼上,可能电压过高。
2,胶体凝结不均匀,可仔细看看胶体的配方
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