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标题:【求助】用荧光显微镜观察细胞膜上抗原抗体的结合

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【求助】用荧光显微镜观察细胞膜上抗原抗体的结合

请教各位:我养的是悬浮细胞,想用荧光显微镜观察一种蛋白与细胞膜上抗体的结合,必须将悬浮细胞贴壁吗?还是就悬浮着就可以观察?还有一抗二抗怎么个孵法呢?通常需要多长时间结合?
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不必的,可以在ep管里与一抗或二抗反应,细胞核(DAPI)染色后,加一些抗退色封片剂,染色后最后在把细胞悬液加在载玻片上,盖上盖玻片,用指甲油或玻璃胶固定一下就可以在荧光显微镜下观察了。
一抗一般可以在室温下1~2h就可以,也可4度时间长一些,视抗体的情况而定。可以参见《细胞实验指南》
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谢谢楼上的,那如果要使悬浮细胞贴壁,常用的方法试剂有哪些呢?
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不必的,可以在ep管里与一抗或二抗反应,细胞核(DAPI)染色后,加一些抗退色封片剂,染色后最后在把细胞悬液加在载玻片上,盖上盖玻片,用指甲油或玻璃胶固定一下就可以在荧光显微镜下观察了。
一抗一般可以在室温下1~2h就可以,也可4度时间长一些,视抗体的情况而定。可以参见《细胞实验指南》

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你好,看到你在这里的回复帖子。我也想做悬浮细胞的免疫荧光电镜。
细胞染色后,你提到用抗退色封片剂。不知道这个抗退色封片剂是什么东西?在实验室常用吗?
你在封片时候提到用指甲油,或者是玻璃胶固定。请问指甲油是我们女士用的那种指甲油就可以了吗?不会影响荧光结果观察吗?
因为细胞已经长成需要答案,希望能得到你的帮助。
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抗退色封片剂主要是想延缓荧光退色的速度,尽量延长对细胞或组织的地观察时间,对于实验完成后立即拍照来说,不用也可。
主要有两种:甘油抗退色封固液和N-丙基没食子酸抗退色液
甘油抗退色封固液配方:
N-丙基没食子酸 5g
DABCO 0.25g
p-对苯二胺 2.5mg
甘油 100ml溶解加氢氧化钠调至中性,分装于-20度保存
N-丙基没食子酸抗退色液:用甘油配制2%的 N-丙基没食子酸,调至PH8.0
也可以买到
另外,我们在2抗洗涤后直接用1~10微克/毫升溶于50%的甘油+50pbs中5分钟后观察,也不错的
指甲油和胶主要在载玻片的4个角涂一点固定,以免滑动,不会影响荧光,胶好些,可以回收载玻片,指甲油不可以的。
就是女士用的就可以
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我的悬浮THP-1细胞用多聚赖氨酸使之贴壁效果很差啊,用PBS轻轻一洗细胞就掉了,郁闷,不知各位大侠有什么其他好的办法让THP-1贴壁的。听说用四型胶原也可,不知效果好吗?
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cocacola[使用道具]
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我的悬浮THP-1细胞用多聚赖氨酸使之贴壁效果很差啊,用PBS轻轻一洗细胞就掉了,郁闷,不知各位大侠有什么其他好的办法让THP-1贴壁的。听说用四型胶原也可,不知效果好吗?
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