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标题:【求助】为什么溴酚蓝在胶里会跑的歪歪扭扭的啊?

birdfish[使用道具]
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发表于 2014-6-9 21:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】为什么溴酚蓝在胶里会跑的歪歪扭扭的啊?

第一次跑胶,诚请各位大侠指点
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prettygirl@[使用道具]
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发表于 2014-6-9 21:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能有以下原因:
1.胶制的不合格.可能是某种溶液PH值不够准确,也可能使某种溶液长期存放不能用了,一般配制胶的溶液在4度存放两个星期都不能用了
2.上样慢.当我们需要很多样品跑胶时,我们上样的速度要快,这样可使带更整齐,溴酚蓝也就跑的很匀称.
3.胶封的不好,我第一开始用酒精封胶,但有个老师(专家)说,最好用水封胶,因为酒精可以吸收胶里面的水分,导致浓缩胶形成剃度,从而影响电泳
以上建议,请不妨一试!
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birdfish[使用道具]
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发表于 2014-6-9 21:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢Smile
1,我的胶是刚刚配好的,不过有个tris可能时间放太长了(20天,常温)
2,我是用IPG胶条的,所以这个问题暂时没有
3,你说的是封胶还是开始的压胶?我是用饱和正丁醇压胶的,放了IPG胶条后再用琼脂糖封胶
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wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2014-6-9 21:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
When you run your western blot, becareful about voltage.
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birdfish[使用道具]
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发表于 2014-6-9 21:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还没做western,恒压跑的,200V
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101010[使用道具]
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发表于 2014-6-9 21:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其影响因素很多，
首先是制胶步骤里，所配的溶液的PH值是否准确，主要是tris，常温存放20天影响不会太大，建议你重新配tris
其次，上样的时间前后是否太长，应尽量提高上样速度，减少溴酚兰在胶里的扩散
跑胶的时候板是否有倾斜，一旦有一点倾斜，就会影响
说了以上这些，最后要说的是如果你的胶最后的蛋白做出来不是歪歪扭扭的话，那么可不必在乎溴酚蓝的歪歪扭扭
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lagua123[使用道具]
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发表于 2014-6-9 21:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以先跑一下预电泳，大概半小时
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avi317[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议检查配胶TRIS 的PH 值，最好每次作前检查，确保胶充分凝固
在电泳前，先跑20-30V电泳10-30 分钟，疏通孔隙。
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bring[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的经验是,如果在80V的时候出现了歪歪扭扭的情况,则提前把电压升到120V,这样可能会使溴酚蓝尽早跑成一条线,但是如果是BUFFER的PH不对的话,就没什么用了.我说的在这种情况主要是在上样的量不均的时候.
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