【求助】请问有没有谁做过VEGF啊？

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标题:【求助】请问有没有谁做过VEGF啊？

HPLC使者[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我最近做VEGF老做不出来，请问各位大侠，有谁做过VEGF的，好不好做出条带啊？步骤和条件怎么样？请赐教，谢谢！！

XYZQ[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做VEGF单抗可能较困难，多抗好做，如果你们实验室整个WB系统没有问题，建议二抗浓度加大

vcve[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

那请问你们的步骤怎么样的？

HPLC使者[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可我也是按照这样的步骤做的啊，就是做不出来，真拿它没办法。不过我用的是小鼠单克隆抗体IgG，不知道这样有没有关系呢？

XYZQ[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

提取肿瘤组织及细胞蛋白，定量后添加上样缓冲液，100℃沸水中煮5分钟，经40mA恒流SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，在冰浴条件下100V恒压1小时转移至PVDF膜上，5%脱脂奶粉封闭1小时，羊抗人多克隆抗体4℃条件下过夜，1×TBST洗脱后用二抗室温下慢摇1小时，再利用ECL化学发光法显影。

XYZQ[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 HPLC使者 于 2014-6-9 22:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

可我也是按照这样的步骤做的啊，就是做不出来，真拿它没办法。不过我用的是小鼠单克隆抗体IgG，不知道这样有没有关系呢？

没有关系,我的结果也没出来,建议找厂家

HPLC使者[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

听说上样量要达到100－150微克才能显出条带，我想是不是我们加的量都不够啊？

XYZQ[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

一般加样量２０微克即可，建议加大甲醇的量，有人说其分子量小，加大甲醇的量可使转膜好