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标题:【求助】GST融合蛋白纯化出现杂带目的带，求高手指点

wzqzy[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
呵呵，感觉应该是HSP系列的，用hsp70解释比较合理!我做过类似实验的。

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多谢，能不能具体说一下是什么意思，是说60KD左右的蛋白是HSP70么，也会被诱导表达么
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yyaxw84[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细菌中表达外源蛋白往往不能有效折叠（由于蛋白量大），这样HSP70便结合在这些misfolded 蛋白上，所以我们往往观察到HSP70量随外源蛋白量的增加而增多。这些仅供参考，不一定对，呵呵！
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wzqzy[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

好的，多谢，可是HSP70似乎不该能够被谷胱苷肽珠子纯化下来啊 ，不过也有可能，多谢大家
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birdfish[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不可能是二聚体吧，你都煮过了，即使是二聚剔也会分开了，可能是杂蛋白吧，楼主可以洗杂蛋白的时候多洗一些 ，还有在蛋白提取buffer里面加点twwen或者增加洗脱buffer里面的盐离子浓度之类在蛋白纯化上优化一下条件。个人愚见，仅供参考。
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wzqzy[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有可能，多谢。我在做次试试，考虑换个菌株试试表达效果
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douding66[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白加loading buffer煮后，从理论上应该是变性的，但实际上并不是对于所有的蛋白都适用，这种情况在我们实验中并不少见，文献也有报道
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gogo[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可是为什么也可以被与GST结合的珠子纯化下来呢,那你最后怎么解决这一问题呢,不然的话下游实验没有办法做啊

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我现在还没有解决好，正卡在这阿，好久了；很郁闷。但我的26kd的地方GST断裂的带很多很多很多的，但是融合蛋白的地方很少很少，甚至wb都检测不到。现在正在做Wb,看是不是能找到断裂下来的我的目的蛋白。
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gogo[使用道具]
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发表于 2014-6-9 22:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得这种观点说不通,如果是自身本底表达蛋白,拥有GST就已经很不可思议了,而同时拥有GST标签和HIS 标签就更不可思议了,我想不会是这种情况

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可是我做过两个胶的比较，确实有这种情况。
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