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标题:【求助】蛋白纯化问题求助

小螺号[使用道具]
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发表于 2014-6-10 09:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白纯化问题求助


如果蛋白分泌到培养基中,可不可以离心后直接将培养基 过Ni-NTA柱纯化?
Ni-NTA柱纯化后的蛋白如何保存?若用来做ELISA,需要经过什么处理吗?
谢谢您的指点!!
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2014-6-10 09:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

分泌到培养基的量应该很少，这样做应该不好纯化出蛋白吧。一般要通过盐析浓缩等的处理。
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小螺号[使用道具]
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发表于 2014-6-10 09:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢!
如果已经用Ni-NTA柱纯化出了蛋白,需要长期保存,应该经过什么处理?保存液中加什么物质?(例如甘油,加多少量)
望多多指教!
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小螺号[使用道具]
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 小中大
就是蛋白的保存
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hold住[使用道具]
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发表于 2014-6-10 09:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可考虑-20度冻存,效果可预实验看复融活力
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小螺号[使用道具]
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 小中大

直接用PBS缓冲液保存,还需加入别的成分吗?
(我刚开始做实验,要检测复融活力还比较困难,实验室也不具备条件.就是 自己一点点的摸索)
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小螺号[使用道具]
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发表于 2014-6-10 10:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

ELISA的试剂什么的都还没买.本来想先表达蛋白保存备用
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发表于 2014-6-10 10:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果蛋白暂时不用，最好放在－７０度保存！通过Ni-NTA柱纯化后的蛋白透析一下，然后再用．
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