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标题:【求助】我的2D电泳怎么了？

eric930[使用道具]
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发表于 2014-6-10 10:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】我的2D电泳怎么了？


刚开始做2D电泳，这次结果有太多的竖条纹，蛋白上样量肯定没有超，请大家帮忙分析一下！


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2014-6-10 10:22
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-6-10 10:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

样品降解了。
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-6-10 10:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不可能呀，我的样品量没有这么多的！
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dog002[使用道具]
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发表于 2014-6-10 10:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你上样前有没有做高速的离心,如果有杂质的话,会出现这样的情况,我也做出过类似的图.
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发表于 2014-6-10 10:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

原因可能有很多：现在主要的问题不是竖条纹，你的凝胶上点不多，上面的竖条纹也可能不是蛋白，也可能事未聚焦好，要从以下几个方面注意：
1.上样量够不够？
2.如果上半部分竖条纹不是蛋白条纹，那就是上槽电泳缓冲液太脏，这是上半部分有竖条纹的主要原因，
3.凝胶的浓度？凝胶下面左侧黑色团是蛋白带还是溴酚兰？是不是蛋白跑出去了。
4.从第一向到第二向的转移有没有问题？胶条的平衡有没有问题，是不是但白丢失？
5.第一向聚焦程序怎么样，是不是没有聚焦好？
6.染色有没有问题？是不是蛋白点没有染色？
7.因为刚开始做，所以还要多重复几次，才能发现具体原因。
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plaa[使用道具]
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发表于 2014-6-10 10:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不可能呀，我的样品量没有这么多的！

===============================================================================================================

没有什么不可能的。降解与样品量无关。
你凝胶左侧下方在溴芬兰的位置上出现了一堆深色物质，那就是蛋白质降解成很小片断后堆积在那里。如果你不确定，可以做一个一向page胶，在泳道最前方将会有一堆深色物质，那就降解了。而且在这个时候你仍然能通过brafold方法测出含量，只是数值可能 会非常的高。
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plaa[使用道具]
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发表于 2014-6-10 10:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

另外，你的凝胶上没有几乎发现蛋白点。仅有的几个 黑点是杂质污染凝胶而已。
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eric930[使用道具]
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发表于 2014-6-10 10:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢大家，我近期会重新做一次。希望能解决问题！
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发表于 2014-6-10 11:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我今天也出现了个问题，但不如你的糟，我得问题是在缓冲BUUFER中忘加SDS了才出现的问题。你可以参考一下原因。祝你成功！！
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-6-10 11:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
平衡缓冲液中如果忘加SDS，竖纹会十分明显，我也遇到过一次。看来做试验还是应该仔细点
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