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标题:【求助】SDS-PAGE电泳问题，实验没法进行，请各位帮忙！

uaubc[使用道具]
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发表于 2014-6-10 11:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE电泳问题，实验没法进行，请各位帮忙！

以前跑胶都很好，最近出现些情况：溴酚蓝指示剂弥散，在浓缩胶不能压成一条线，电泳底部呈现黄色，marker也不好，有时在分离胶上游跑不动，我只换了一个上样缓冲液，是不是上样缓冲液的问题啊？以前从没有出现这种情况，实验无法进行，请各位帮忙！
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2014-6-10 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也出现过类似情况，很难解释。头一天好好的，能够压成一条线，结果第二天，溴酚蓝指示剂弥散，电泳底部呈现黄色。我总结了一下，可没分析出有用的结果。有时候胶中部以下还会进气泡。
但是尽管溴酚蓝指示剂弥散，在浓缩胶不能压成一条线，跑完后染色一看，也没什么影响，条带也比较清晰，只是进气泡了就废了，因为很难跑的动，条带的分离效果就不行了。
可以试试重新配上样缓冲液，还有电泳缓冲液，另外我想铸胶是不是也有影响。压缩胶浓度稀了会不会导致弥散？
还要注意每次跑之前隔天的样品都要重新加热。
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2014-6-10 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

凝胶不能放时间太长，最好现配现用
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wawa[使用道具]
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发表于 2014-6-10 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这种情况多为缓冲系统有问题，主要检查电极缓冲液和灌胶的tris-HCL的PH是否正确。
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cwcwcww[使用道具]
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发表于 2014-6-10 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

重新配了B液C液，还是这样，我用的缓冲液是十倍稀释的，应该没有问题，今天换了一个上样缓冲液试试，我的上样缓冲液是买的不同厂家的，不过我的marker也没有跑好，是不是胶和缓冲液的事情，我现在只有一个一个排除，请高手指教！
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abc816[使用道具]
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发表于 2014-6-10 11:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的胶的聚丙烯酰氨贮存液是不时间太长了，只能用一个月的。
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abc816[使用道具]
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发表于 2014-6-10 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电泳底部出现黄色好象是PH的问题。
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2014-6-10 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

样品pH的问题，似乎是过酸。
样品加上样buffer后，如果是黄色，加NaOH至蓝色，再上样。
似乎是这样子的，我记得在电泳技术手册里见过类似的问题。
我自己没遇到过。
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2014-6-10 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有可能是running buffer的问题吗，我以前有一次弄错的running buffer，出现过这样的情况，loading buffer变黄，没办法跑成一条线。建议好好检查一下所用的缓冲液。条件成熟的反应系统，不要轻易改变。
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uaubc[使用道具]
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发表于 2014-6-10 11:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢大家帮忙！我换了一批试剂，可还是扩散，不过和先前的不一样，这次只是样底部溴酚蓝扩散，不影响结果，考马染蛋白条带很好，不知是什么原因？请指教！我的试剂都是买的现成的，我没有配，以前从未出现这种情况。
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