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标题:【求助】pQE质粒的选择

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发表于 2014-6-10 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】pQE质粒的选择


已经用pQE30构建了一个重组质粒，选择的是BamHI 和Sal I两个酶切位点（因为目的片段上只有这两个酶切位点没有），但重组成功后蛋白不能表达，欲重新选择载体构建质粒，是否还能选择利用目前这两个酶切位点选择其他pQE系列的质粒构建载体，因为比较了一下pQE40，发现如还是这两个酶切位点，酶切得到的片断完全一样，如果这样是不是就没有意义了啊？那还有哪些质粒可以选择呢？
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发表于 2014-6-10 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议摸索蛋白表达的条件
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发表于 2014-6-10 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白表达条件摸索过，1mmol/L和2mmol/L IPTG刺激，诱导时间分贝有2、4、6、过夜，诱导温度37℃，但均未见有表达条带出现，一同做试验的两人所构建的质粒均有表达，条件基本一样，已经无计可施，请高手给予指点帮助！
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发表于 2014-6-10 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

降低温度，我表达过一个蛋白，37度不能表达，26度才可以。
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发表于 2014-6-10 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建议重新构建。因为表达蛋白不易，即使摇瓶能表达，发酵也求必能表达。本人现在做的一个也是PQE，摇瓶表达条件摸索了可以表达，但发酵就不行。
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发表于 2014-6-10 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
降低温度，我表达过一个蛋白，37度不能表达，26度才可以。

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请问yj409，你那个26度才表达得蛋白也是构建在pQE30上吗？还是别得？
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2014-6-10 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该不是酶切位点的问题吧
再查查阅读框是不是有问题，或者换个其它系列的载体试一试，比如PET系列的载体。
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987789[使用道具]
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发表于 2014-6-10 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是指更换pET系统吗？主要希望保留原酶切位点，不用重复测序！请问pQE80-L和pET系统哪个表达成功率更好一些啊？
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