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标题:【求助】请教SDS_PAGE灌胶

any333[使用道具]
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发表于 2014-6-10 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请教SDS_PAGE灌胶


请问为什么灌注的分离胶界面会出现波浪状？可能是哪些原因？多谢大家
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-6-10 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1 灌好分离胶后加了水吗？应该加一层水压一下。
2 玻璃板一定要洗干净。
3 加水的时候不要太用力。
4 漏胶厉害的时候也可能出现这种情况。
bless
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any333[使用道具]
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发表于 2014-6-10 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

怀疑是玻璃板不干净，重新洗了再做还是那样。
加水了，也注意慢点加水避免冲到胶面
没有漏胶
可不可能是最近温度太高的原因？
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-6-10 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那是灌的时候就是波浪型的还是倒了水以后
如果是前者应该是玻璃板不够干净
使劲擦啊Tongue
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NBA[使用道具]
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发表于 2014-6-10 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上说得比较全面，
今天我也遇到这样的问题，今天有点偷懒没加异丙醇，所以胶面不平。
1，我在分离胶的上面加了少许的异丙醇，兼有消泡的作用，效果很好。
2，我们实验室还有的同学在分离胶的上面灌满水，这种方法也可以
3，漏胶的情况我见过，主要是胶的边缘不好，上面还可以，
下次做胶加水或异丙醇就可以了
估计问题不大
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-6-10 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
异丙醇效果是要好一些。
关于气泡，以前做测序胶的时候还抽气泡的。真空泵抽。但小胶一般不要吧，动作轻点就好。
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发表于 2014-6-10 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

异丙醇没有加过，一般是加水，效果还可以。LZ可能原因如下：
1 电泳板洗的不干净。板子表面是特殊处理的，最好是用软刷子洗，不要造成划痕。dH2O荡洗后烘干待温度降至室温即可用。
2 灌分离胶从一侧慢慢加，加到足够量后以水液封，再轻微在台面上震荡以压平胶面，置平整处待凝。
3 TEMED量不可过多，一般可大于标准量几微升，但过多则会导致胶凝过快，液封之前即可能凝固。
4 灌胶前检漏，一般不会漏液。即便漏液多成斜面，波浪状可能不大。
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windy+++[使用道具]
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发表于 2014-6-10 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我认为关键问题不在加不加异丙醇，一般丙烯酰胺的浓度≤8时，在分离胶上可覆盖一层0.1％的SDS，丙烯酰胺的浓度≥10％时，在分离胶上可加一层异丙醇或加满水，我们做的胶一般异丙醇浓度都是大于10的，加水效果就很好，考虑楼主的原因除了上述原因外可能如下：
1.加样的各个物质浓度是否吸取准确；
2.加完后，混匀，马上加，加晚了容易出现先凝、而造成波浪状的现象。
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hold住[使用道具]
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发表于 2014-6-10 16:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
注意 temed不要加太多， 操作环境温度不要过高，这两原因都有可能促使胶凝固过快，导致页面埋没有恢复平整就凝固了。
至于加水或异丙醇 个人认为都可以 异丙醇效果稍好。
另外一个可能的原因就是 玻璃板一定要清洗干净并晾干。胶凝后 水倒掉，然后 用滤纸 轻轻将残留在胶面上的水吸干即可。
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