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这是我做课题明胶酶谱的步骤，借鉴一下。
细胞培养及培养上清收集 按2.5×106细胞每皿，将HepG2-XB细胞及HepG2-HIS细胞分别接种至6cm平皿，培养24小时后以无血清DMEM洗3遍，以2ml含G418 400μg/ml的无血清DMEM继续培养，24小时后收集上清，离心去除细胞，上清冻存于-20°C备用；细胞以胰酶消化后重悬计数，以校正酶谱检测时各样品上样量。HT1080细胞以含10%胎牛血清的DMEM培养，至细胞覆盖约70%时，无血清DMEM洗3遍，以5ml无血清DMEM继续培养，24小时后收集上清，离心去除细胞，上清冻存于-20°C备用。
2、明胶酶谱法检测MMPs的表达及活性
（1）明胶溶液配制 称取10mg明胶，加入高压灭菌三蒸水，室温放置2h，使其吸水膨胀，然后置于65°C水浴，在15min之内溶成均匀的液体，最后定容至终浓度10mg/ml，于4°C备用。
（2）SDS-PAGE胶的灌制 灌制10%SDS-PAGE胶，其中加入10mg/ml的明胶溶液，使明胶终浓度为0.5mg/ml。
（3）电泳 上清与5×上样缓冲液以4：1混匀，加入10%分离胶，4°C、40mA电泳1.5-2小时，至溴酚兰达到末端。
5×上样缓冲液: Tris-HCl(PH6.8) 0.4M
SDS 5%
Glycerol 20%
Bromophenol blue 0.03%
（4）2.5%Triton X-100清洗 胶置于100ml洗脱液中，摇床震荡1小时，以洗脱SDS，使蛋白质复性，每15分钟更新一次洗脱液。
洗脱缓冲液： Tris-HCl [pH 7.5] 50mM
CaCl2 5mM
ZnCl2 1μM
Triton X-100 2.5% (v/v)
（5）孵育 胶置于100ml孵育缓冲液中，于37°C水浴缓慢震荡孵育40小时。
孵育缓冲液： Tris-HCl（pH7.5） 50mM
NaCl 0.2M
CaCl2 5mM
ZnCl2 1μM
Brij-35 0.02%
Sodium azide 0.2mM
（6）染色 将充分孵育后的胶以双蒸水漂洗5分钟，重复两次，然后置于0.25%的考马斯亮蓝R250染液中，放在平缓摇动的摇床上于室温染色4小时。
考染液： Methanol 45%
Acetic acid 10%
Coomassie R blue 0.25%
（7）脱色 将染色后的胶置于脱色液中，放在平缓摇动的摇床上于室温脱色，每30分钟更新一次脱色液，至深蓝色背景上显出无色清晰酶谱条带停止。然后以双蒸水漂洗残留染料。
脱色液： Methanol 45%
Acetic acid 10%
（8）扫描分析 将胶以Image Scanner（Amersham）扫描成像，ImageQuant TL V2003软件分析各酶谱条带灰度值，比较HepG2-XB细胞及HepG2-HIS细胞中MMPs活性的差别。
3、胶原酶谱法检测MMPs的表达及活性 胶原溶液配制：称取10mg胶原，溶于0.3M醋酸溶液中，最后定容至10mg/ml，于4°C备用。其余步骤同明胶酶谱法。
4、反向明胶酶谱法检测TIMPs的表达及活性 将5µg的Active-MMP2溶于1%SDS溶液中，终浓度为10µg/ml,冻存于-80°C备用。配制12%的SDS-PAGE分离胶，其中含明胶终浓度为2mg/ml，Active-MMP2终浓度为0.1µg/ml,孵育时间为24小时，脱色至看到无色背景中显出深蓝色清晰TIMPs条带，其余步骤同明胶酶谱法。
