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标题:【求助】GST问题

tie8[使用道具]
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发表于 2014-6-10 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】GST问题


本人新手，拟采用GST pull down 作蛋白质的相互作用。大致思路：已采用免疫共沉淀确定A与B存在相互作用，且获得了A＆B的真核表达质粒。现将A分为七个结构域，进一步确定A与B的互作域。请问1）将A及其截短的基因片断所表达的蛋白质作为bait蛋白还是将B作为bait蛋白合适？2）prey蛋白如何获得？多谢高手指点。
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发表于 2014-6-10 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
本人新手，拟采用GST pull down 作蛋白质的相互作用。大致思路：已采用免疫共沉淀确定A与B存在相互作用，且获得了A＆B的真核表达质粒。现将A分为七个结构域，进一步确定A与B的互作域。请问1）将A及其截短的基因片断所表达的蛋白质作为bait蛋白还是将B作为bait蛋白合适？2）prey蛋白如何获得？多谢高手指点。

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A片断蛋白和B蛋白做为bait应该都可行，但似乎以B做为bait更省事些
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发表于 2014-6-10 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也这么觉得，但是有师兄告诉我说应以A片断做bait,因为prey蛋白通常是采用真核表达，而真核表达比原核表达要容易，所以我自己现在是晕的，不知该怎么做，希望有大侠可以指点一二。非常感谢！
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发表于 2014-6-10 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
说错了是真核表达比原核表达要难做
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发表于 2014-6-10 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

真核表达难不难，对于不同的蛋白有着不同的结论。有的蛋白确实比较变态，是很难表达纯化。但对于你的GST pull down过程我觉得要求的蛋白表达量应该不用很高，可以考虑用瞬时表达，既快又方便。
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tie8[使用道具]
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发表于 2014-6-10 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不好意思,瞬时表达是什么DD我还不知道,我先查查去,还有大侠能提供更多的建议不,急啊,老板催着呢.
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