小中大【求助】关于用Bradford法测定蛋白质含量测定时出现的问题
我用Bradford法测定蛋白质的含量，在做标准曲线时出现了很大的问题，请各位高手帮忙分析分析。
试验如下：
试剂：
（1）标准牛血清蛋白质溶液（100ug/ml）：称取牛血清蛋白(BSA)，配制成0.1mg/ml的标准蛋白质溶液。
（2）考马斯亮兰G—250溶液：称100mg考马斯亮兰G—250，溶于50ml
95%的乙醇后，再加入100ml 85%（W/V）的磷酸，用蒸馏水稀释至1升。
实验步骤：
取6支试管，各试管分别加入：0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml标准牛血清蛋白质溶液（100ug/ml），用蒸馏水补足到1.0ml，最后各试管中分别加入5.0ml考马斯亮兰G—250试剂，摇匀，并放置5分钟左右，在595nm波长下测定吸收度，以蛋白质浓度为横坐标，以吸收度为纵坐标绘制标准曲线。
问题：
吸收值太小，最大不到0.2，且很不稳定，不成线性关系，随蛋白质浓度的变化，吸收值不呈现明显的变化。
对照品是新买的，考马斯亮兰G—250溶液也重复配制验证过，现在找不出什么原因，请各位高手赶紧帮忙分析分析，很急啊，不胜感谢！！
