【求助】求助转膜问题

蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】求助转膜问题

15 1/2 1 2 ››

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】求助转膜问题

fox_79[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76205
精华 0
积分 546
帖子 691
信誉分 100
可用分 4423
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态离线

发表于 2014-6-10 16:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位高手，我的蛋白是110KD和97KD，湿转200mA,2小时，预染marker全转上去了，可是我的样品蛋白没转上去，小分子蛋白都没上去。胶上的条带比较清楚。
转移缓冲液：39 mmol/L甘氨酸，48 mmol/L Tris base，0.037% SDS(电泳级)，20% 甲醇。两个月前配制，4度保存。
做了两次都是这样。用的PVDF膜，用甲醇泡过，用转移缓冲液平衡10分钟。胶在转移缓冲液中平衡30分钟。滤纸也用转移缓冲液湿润了。海绵垫没有。请各位高手帮忙找找原因。着急啊！！

fsdd817[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 78590
精华 1
积分 590
帖子 795
信誉分 102
可用分 4841
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-30
状态离线

发表于 2014-6-10 16:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 fox_79 于 2014-6-10 16:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

各位高手，我的蛋白是110KD和97KD，湿转200mA,2小时，预染marker全转上去了，可是我的样品蛋白没转上去，小分子蛋白都没上去。胶上的条带比较清楚。
转移缓冲液：39 mmol/L甘氨酸，48 mmol/L Tris base，0.037% SDS(电泳级)，20% 甲醇 ...

换转移液

fox_79[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76205
精华 0
积分 546
帖子 691
信誉分 100
可用分 4423
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态离线

发表于 2014-6-10 16:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果转膜液有问题，为什么marker可以转上去呢？

ritou1985[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77664
精华 0
积分 644
帖子 948
信誉分 100
可用分 5596
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态离线

发表于 2014-6-10 16:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

换transfer buffer,如marker 可以转，那么蛋白也应可转过

jkobn[使用道具]
三级
Rank: 3