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标题:【求助】免疫共沉淀的分子量

dragonkilly[使用道具]
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发表于 2014-6-10 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】免疫共沉淀的分子量

做免疫共沉淀时，沉淀下来的蛋白的分子量应该是多大，是两种相互作用蛋白的分子量之和吗？急！谢谢各位了！
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jujuba[使用道具]
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发表于 2014-6-10 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得这要看你做完免疫沉淀后怎么处理了，如果你在A/G介质里加了SDS上样buffer煮沸的话，蛋白复合物应该已经解离了，跑胶看到的是单个的蛋白。
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2014-6-10 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢指点，那我是否可以认为，如果在后面Western blot 中能够检测到一种蛋白，即两种蛋白存在相互作用呢？或者用什么方法处理免疫沉淀复合物可以让二者不解离呢？
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jujuba[使用道具]
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发表于 2014-6-10 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不太明白，你是把一种蛋白（不是抗体）偶联到介质上，想做出它的相互作用蛋白吗？请详细说一下你的实验步骤。
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2014-6-10 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是检测两种已知蛋白间是否存在相互作用，首先用一种蛋白的抗体对核蛋白进行沉淀，如果二者间存在相互作用，那么另一种蛋白也会同时被沉淀下来，将免疫沉淀复合物用A/G收集，煮沸后，跑胶，转膜，并用另一种蛋白的抗体进行杂交。请多多指点！
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2014-6-10 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

煮沸后相互作用的蛋白能解离吗?
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2014-6-10 17:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般相互作用蛋白应该是不存在共价键结合的。所以SDS煮了后会解离
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2014-6-10 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我认为你的做法应该没有问题，既然已经解离了，那么检测到蛋白的分子量就是原来的分子量。
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