小中大【求助】我在IEF聚焦时电压只有在2200－3000V左右
我也出现了差不多的情况，我在IEF聚焦时电压也只有在2200－3000V左右，也一直上不去，就是不知道什么原因。一般来说聚焦过程中电压上不去就是因为样品中盐离子浓度太高，但是真核细胞应该没有多少盐分，而且我在裂解过程中也没有加入盐离子，请遇到过相似问题或知道怎么回事的大虾给点意见，我都快急疯了。
具体参数：
真核细胞
7cm 胶条 PH3－10
裂解液：7M 尿素，2M 硫脲，4％ CHAPS,1% DTT,5％ IPG BUFFER
水化液：7M 尿素，2M 硫脲，2 CHAPS,1% DTT,5％ IPG BUFFER
裂解方法:将贴壁细胞用生理盐水洗后刮下，离心后吸干上清，加入裂解液和蛋白酶抑制剂，超声裂解，12000转离心，然后测蛋白浓度后根据上样量加入水化液再次12000转离心，在进行被动水化。
IEF 条件：50V 1h
150V 1h
250V 1h
500V 30min
1000V 30min
8000V 2h
8000V 25000vhs
但是聚焦根本到不了8000V，做了几次都只在2500V左右就上不去了，同时电流也下不来，在50uA,请各位帮帮忙看看！
