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标题:【求助】北京六一半干转膜仪的转膜条件

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发表于 2014-6-10 18:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】北京六一半干转膜仪的转膜条件


我想检测30KD左右的蛋白的含量，用北京六一半干转膜仪转后，用丽春红染不出条带，孵抗体也没有条带，但是跑完胶上有条带，转完膜的胶上也没有条带，不知条带去了哪里。
我的转膜条件是40mA 或者 20mA 2 小时，均无所获，各位大虾建议一下转膜条件，是不是转膜条件不行还是别的。
还有丽春红配制时，三氯乙酸有一些发潮，是不是会影响丽春红的染色效果，请多多指教！
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发表于 2014-6-10 18:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如丽春红染不出，说明蛋白没有转到膜上，胶染不出，先确定PAGE 有无问题，转膜前染下胶，如有，那就说明你的蛋白很大可能转膜时间过长，或者转膜时散热不好，蛋白降解。
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发表于 2014-6-10 18:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你用的是什么膜啊?
pvdf膜需要用甲醇处理一下
good luck!!
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发表于 2014-6-10 18:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白过热也可以降解的吗, 我赶紧降下温试试, 多谢高手指点.
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发表于 2014-6-10 18:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

下午在转膜仪旁边放满了冰块，并且将电流提高到了60mA 1.5h转完后，丽春红也没有染出色，而且加了一抗二抗也还是没有结果。。。唉，，，
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发表于 2014-6-10 18:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
转膜的电流是按照膜的面积算的，我们的是5*8.5的膜，用50mA.转1h,效果还不错。我们用的也是六一的半干转膜仪。还有，我一般不用里面自带的大海绵，直接把3层滤纸放在负极板上，然后是胶，接着是膜，再盖滤纸，我么这个仪器正极再上的，不知你那个是不是.
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发表于 2014-6-10 18:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们也是正极在上的，那转膜的电流与膜的面积是怎么换算的呢？多谢指教!
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xyw5[使用道具]
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发表于 2014-6-10 18:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般0.8-1.3MA/CM2，即可
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发表于 2014-6-10 18:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢，因为这两天有个会议要参加，过十天再试，试完了再向大家汇报结果。。
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redbutterfly[使用道具]
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 小中大

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