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标题:【求助】7KD蛋白怎么跑SDS-PAGE

花想容[使用道具]
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发表于 2014-6-11 09:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】7KD蛋白怎么跑SDS-PAGE


我表达的蛋白是大肠杆菌融合表达的，标签是MBP，目的蛋白7.9KD，我用Factor Xa进行酶切融合蛋白，每次跑SDS-PAGE都能看到MBP（42.5KD），而目的蛋白7.9KD却怎么也看不到，哪位高手能指导指导我啊？
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发表于 2014-6-11 09:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

配制15%以上（16%-18%）的胶试试，应该可以的！
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发表于 2014-6-11 09:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

配制15%以上的胶,电压低一点，跑的时间长一点,应该可以跑出来的
2500的标准蛋白都可以跑出来啊
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发表于 2014-6-11 09:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

18%胶 低电压，80V 2-3 小时分离，没问题
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-6-11 09:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你如果用15%以上的胶还跑不出条带，你看看是不是蛋白降解了？
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-6-11 09:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果有条件，可以做个WB
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发表于 2014-6-11 09:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
跑tricine 胶,转膜时间缩短.(最好家小分子预染marker).我跑过4KD的蛋白.
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发表于 2014-6-11 09:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问调低电压是什么作用？
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发表于 2014-6-11 09:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问调低电压是什么作用？

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调低电压，电泳时间会增长，效果会好一些的。
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nn255[使用道具]
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发表于 2014-6-11 09:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
本人觉得其实你提高分离胶，对于分离这么小的蛋白效果不会很明显，在跑胶的时候，很难分离出来，因此建议你要采取Tris－tricine系统，这个系统适合分离小分子蛋白，而且在胶配胶中，你可以加入适量的尿素。我这里有一些这些胶的相关资料，对你会有帮助的。
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