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标题:【求助】蛋白质电泳异常！

youyou99[使用道具]
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发表于 2014-6-11 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白质电泳异常！


请教各位高手，我用Ni-NTA柱纯化蛋白，但是最后蛋白在经透析和浓缩后跑电泳，条带很奇怪，不知谁遇到过这种问题，请指教到底是样品处理拿步出了问题，不胜感激！
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remenb[使用道具]
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发表于 2014-6-11 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你脱盐后浓缩蛋白用的是什么方法？有机溶剂沉淀？
更有可能是配胶的问题，各溶液放置时间有没有过长？
是你的样品跑出这样的结果，还是其他人的样品也是如此？
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发表于 2014-6-11 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胶凝的不均匀，有气泡！
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youyou99[使用道具]
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发表于 2014-6-11 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没有气泡，我重复了实验还是这个样子。只有我的样品出现了这样的电泳行为。我用的PEG2000浓缩的蛋白
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remenb[使用道具]
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发表于 2014-6-11 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

盐浓度过大
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nut6694[使用道具]
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发表于 2014-6-11 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你可以用TCA或丙酮来沉淀并浓缩蛋白
另外，你的电泳缓冲液应该不是新配的，本底和背景太多，最好用重蒸水新配
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any333[使用道具]
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发表于 2014-6-11 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得是盐含量过高，离子强度太大，PEG2000浓缩透析很难除净盐，换种浓缩方法试试。再有PEG2000的分子量是不是太小了，你的透析袋排阻极限是多少，有没有可能PEG2000透过透析袋污染了你的样品造成的。
请教一下 ：
本底和背景太深的主要原因是电泳缓冲液太旧么？还有什么其它的原因呢。
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-6-11 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有PEG污染吧
制样的时候TCA沉淀以后用80％的丙酮和丙酮洗两次
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linlinstar[使用道具]
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发表于 2014-6-11 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
原因是盐浓度过高,没错
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avi317[使用道具]
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发表于 2014-6-11 15:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我遇到过这种情况，原因在于浓缩蛋白的方法，不宜采用PEG8000,会发生蛋白修饰。建议采用超浓缩。
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