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1、花费:其实我们实验室算过一个固相2D的成本大约280元一张胶图片下来就够了,前提是一部分用SIGEMA进口分装的试剂,其它的能用国产的也可以了。一次2D电泳下来大约用到以下试剂Sad你可以查看一下价格):
(1)尿素、丙烯酰胺、N,N-甲叉双丙烯酰胺、十二烷基磺酸钠(SDS)、过硫酸铵(AP)、Tris、甘油、硝酸银、甘氨酸、矿物油(北京鼎国);
(2)硫脲、二硫苏糖醇(DTT)、3[(3 胆酰胺丙基)二乙胺]丙磺酸(CHAPS)、碘乙酰胺(IAA)、四甲基乙二胺(TEMED)、( Sigma 公司产品,USA);
(3)蛋白marker、低熔点琼脂糖、溴酚蓝、甘油;
(4)硫代硫酸钠、无水碳酸钠、无水醋酸钠、无水乙醇、冰醋酸、甲醛、甲醇、正丁醇等为国产分析纯;
(5)IPGstrip ,IPG buffer。
2、时间:其实最重要的还是样品制备。如果你的样品没有问题,以后的工作就简单了,另外如果别人没有做过,你在第一项聚焦程序上可能要摸索一些时间,第二向现在的技术都很成熟,问题不是很大。(我们实验室一个师弟从接触到完成用了不到一个月就跑出来10张很不错的图谱,当然一些技术条件是参照我们摸索出来的方法)。所以刚开始做还是要看看别人现场怎么操作,系统的看一次胜过看好几遍书,毕竟看会形象些。
3、其它一些建议:其实你如果时间紧,一开始做就要考虑你将来是不是要作质谱鉴定。要做的话就要考虑上样和银染尽量能质谱分析兼用。因为时间有限。
4、另外一张胶一般用两天搞定!还有图谱分析液很麻烦!
我这边有一些双向电泳的资料,和分析软件的说明书等!如果需要的话可以联系我!
【2D_Platinum_簡易操作手冊.pdf(2.46M) ;2DE_chinese_workshop_manual.pdf(187.37K) ;ImageMaster中文手册.pdf(6.7M) ;BIO-RAD双向电泳培训(资料).doc(310.39K) 】
祝工作顺利!