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标题:【求助】关于SDS-PAGE

98776langtao[使用道具]
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发表于 2014-6-12 18:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于SDS-PAGE


我在做SDS-PAGE时,12%聚丙烯酰氨凝胶,150V 10min,再换180V 40min.跑胶时电流老是很小,只有10mA,而且条带横向扩散严重,开始时呈月牙形.向各位前辈请教.谢谢!
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jkobn[使用道具]
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发表于 2014-6-12 18:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

把你跑的胶贴出来看看 可以试试恒流跑
还有胶的质量也有影响 丙烯酰氨要过滤后 配胶
不知道开始你的电流正常否？你用的仪器是哪的？
如果是六一厂的垂直板 有时候有漏液的现象
如果负极漏液 低于两板间 就会电流下降
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lxh031[使用道具]
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发表于 2014-6-12 18:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那么高的电压不会只有那么小的电流
你看看你的操作是不是有问题,比如:封胶框拆了没有;内槽液面是否过胶;是否漏液等等细节的东西.
如果是药品的问题我想不会出这么明显的现象,你看一下你的分离胶是否压平,分离胶和浓缩胶是不是凝好了,不知道你的制胶的参数,建议不要加过多的
temed,混匀后凝的慢一点没有问题(15-30分钟)
再有就是你tris的ph值了,尽量校准一点,不然会影响你的跑胶质量!!
个人意见,仅供参考
good luck!
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3648755[使用道具]
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发表于 2014-6-12 18:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胶的质量对电流的影响比较大，看看制胶过程有什么僻陋吧
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-6-12 18:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
漏液引起电流不通畅的可能性大。跑电泳时注意观察是否如此。如果是，随时补液。
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caihong[使用道具]
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发表于 2014-6-12 18:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

参考：
1，将样品尽量靠中间点样，其次在两侧空余样品孔点上loading buffer，减少边缘效应，可以避免两侧条带横向扩散
2，积层胶只跑了10min,可能是聚焦不完全导致的条带呈月牙形,可适当增加积层胶长度，改为恒流
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98776langtao[使用道具]
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发表于 2014-6-12 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位的指点,不胜感激!
胶在跑的时候是月芽形的,但染色之后还可以,只是条带较宽.我想先看看制胶是不是有问题.我现在刚开始做,可能技术太差.
谢谢你们!!!!!
祝大家好运
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-6-12 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

人活一辈子战友：
首先检查一下的配胶试剂，如TRIS PH值、BCR-BIS最好在3月内使用，等有无问题；如无问题，你用那么高的电压，电流不应如低，你可在跑浓缩胶前，先预电泳20-30V 恒压 10-20 min，用来疏通胶孔，确保畅通，然后可80-100V 浓缩胶，120V 分离胶，先说这些吧。
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nvdabing[使用道具]
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发表于 2014-6-12 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
SDS-PAGE后目的条带比理论值小5KDa．测序和marker都没问题，谁碰倒过这种情况么．
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