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标题:【求助】LCM+2DE-MALDI

c86v[使用道具]
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发表于 2014-6-14 09:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】LCM+2DE-MALDI


LCM+2DE-MALDI
最近兄弟准备做LCM提取肿瘤细胞作2-D，但听说很难做，希望大家多提宝贵意见，谢谢！
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-6-14 09:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做2DE需要的蛋白量相对大一些。不知你是银染鉴定还是考染鉴定。LCM得到如此多的细胞，还是比较费力的。
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remenb[使用道具]
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发表于 2014-6-14 09:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个方法非常的好，但是LCM代价挺高的，不知你能否得到足够的细胞用于2D.因为双向需要的细胞数目相对要多些。
就2D来说，如果实验室没有比较成熟的技术，自己建立条件的话，难度挺大的，因为不管是样品的处理，一向、二向以及银染和随后的软件分析都需要相当高的技术含量。
还有MS,不管是MALDI还是ESI,最后的结果分析也是很有挑战的，如果没有相关技术人员支持的话。
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发表于 2014-6-14 09:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是看到了二军大王红阳教授的2004年的发在proteomics的那篇文章才有信心作的，她介绍的LCM+2DE-MALDI方法学，用了一个病人的标本就可做成了，如果兄弟多用些标本，应该可以的吧。
有几个问题，请教各位大虾！
有位兄弟说 250 000个细胞做鸟枪就够了，2-DE要三倍才够，是这样吗？
同组的病人用“池”的方法行吗？
染色对提蛋白说是影响不大，是吗？
蛋白提好好马上就要跑电泳吗？
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c86v[使用道具]
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发表于 2014-6-14 09:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白质组技术支持兄弟这边是有的，但是现在主要的问题是显微切割的问题！
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c86v[使用道具]
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发表于 2014-6-14 09:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有兄弟也在做吗？多指导，有protocol最好了！
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2014-6-14 09:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=6661246&sty=1')
这里面有惊喜，看你是否肯挖掘~~
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