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标题:【求助】western bolt电泳时间

DONT[使用道具]
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发表于 2014-6-14 09:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】western bolt电泳时间


我做western 发现，4%上层胶跑完需要2个半小时，别人讲最多需要1小时样品即进入分离胶。我用的电压开始为80v，泳动极其缓慢，换为120v后稍有起色，但压缩效果也不好，marker长度仍近1cm。
电解液和胶的配制试剂均为新鲜配制。
怀疑电泳仪电压不准，但检测之后，确定也无问题。
请各位高手予以指点，非常感谢。。
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2014-6-14 09:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你的样品处理上是不是有点问题？？！需要找找原因．
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2014-6-14 09:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能是电泳缓冲液没有加够，一定要没过加样孔
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发表于 2014-6-14 09:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
电泳缓冲液配制有问题时会出现这种情况，我建议你重新查一下配方。
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2014-6-14 09:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看看电流有多大把？
我一半浓缩胶60V 18MA
分离胶110V 20MA
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nut6694[使用道具]
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发表于 2014-6-14 09:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
愚见：
1, 注意上样缓冲液，因上样缓冲液中SDS是使蛋白样带负电的关键，
2，配制电泳缓冲液、积层胶、分离胶的pH一定要准确，尤其是积层胶，否则就会出现样品聚焦压缩效果不好
3，如果是7cm*8cm胶，电压开始可达到200v
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