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标题:【求助】两种结合的蛋白质如何分离？

junjie05[使用道具]
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发表于 2014-6-14 09:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】两种结合的蛋白质如何分离？


我现在怀疑2个蛋白有相互结合，有没有好的方法不损伤蛋白而把这2个蛋白分离后分别纯化？
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junjie05[使用道具]
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发表于 2014-6-14 10:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
另外纯化的方法要求能够短时间内获得的量比较多
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junjie05[使用道具]
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发表于 2014-6-14 10:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我再简单说明一下，我的蛋白是纯化过的，但是里面含有一种污染的蛋白质，我现在怀疑是2个蛋白之间有作用。
我曾经用SDS上样缓冲液处理蛋白质，随后用millipore的超滤柱纯化，但是蛋白质和SDS把膜堵住了，没有成功。
所以我想知道有没有更好的方法能将这2种蛋白分离？
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发表于 2014-6-14 10:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是什么连接？二硫键吗？
变性与非变性电泳显示的状态如何？
加不加DTT的电泳状态有不同吗？
上来就用超滤柱
还是挺有魄力的
柱子堵了 要不要换新的
我这里有便宜的 找我买吧 呵呵
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junjie05[使用道具]
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发表于 2014-6-14 10:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电泳后有多条带，曾用Western blot检测到污染蛋白质的存在，但是不知道如何将其完全分开。
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发表于 2014-6-14 10:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

分子量是多大？
能不能试试分子筛？
用SDS处理以下
上一个分子筛
收不同的峰尖做电泳和WB
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junjie05[使用道具]
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发表于 2014-6-14 10:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

SDS试过分子筛，但是不能完全去除SDS，而且纯化速度慢，产物回收效率低。
我希望得到的产物不是用来做WB，否则直接把蛋白上样做也是一样的。
灯光是公司里的？你的柱子什么牌子的，价格？
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tuuu2[使用道具]
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发表于 2014-6-14 10:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

因为您现在的情况比较复杂
信息也不是太清晰
我暂时也提不出什么明确的建议
如果有可能我们最好电话沟通一下（北京）13911681741
我的公司是搞纯化外包业务的
一般普通的项目1到2个月就可以完成
您不妨考虑一下纯化外包
如果我们的工程师能够亲手做一下实验
会得到许多感性的认识
这对纯化研究很有帮助
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junjie05[使用道具]
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发表于 2014-6-14 10:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道有没有人做过类似的实验，能不能给点提示？
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2014-6-14 10:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先要明确是怎么样的作用力,其次要知道你这两蛋白的分子量,要证明是不是有作用不难,选择合适的凝胶柱子分离一下,如果总也分不开,那可以选择高盐,或者有表面活性剂这样条件去分离,因为一般非共价作用的不外乎有离子和疏水两种,如果是二硫键共价结合那就需要用还原剂打开.
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