蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】请教３０ＫＤ左右蛋白转膜条件？

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】请教３０ＫＤ左右蛋白转膜条件？

wsll[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76794
精华 0
积分 423
帖子 505
信誉分 100
可用分 3393
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
1

发表于 2014-6-14 11:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】请教３０ＫＤ左右蛋白转膜条件？


做３０ＫＤ的蛋白转膜湿转，曾经用过１００ＭＡ三小时，也曾经暴光成功过，可后来结果不好，改为５０ma两小时，同时减少ＳＤＳ的用量，感觉转膜还可以，可是总是暴不出带，怀疑还是转膜的问题，还望请教各位大侠！多谢！
顶部
tangxin_80[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79896
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4621
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
2

发表于 2014-6-14 11:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是BIO-RED转膜仪的话，用衡压15v，转60分钟，效果很好。你试一下
顶部
wsll[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76794
精华 0
积分 423
帖子 505
信誉分 100
可用分 3393
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
3

发表于 2014-6-14 11:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室别人做的１００ma三小时４２ＫＤ的内参也能暴出来，我觉得是不是两小时时间都有点短呀，我用恒流的时候发现电压从１６v一直上升，最后到２２v左右，，如果用１５v一小时是不是时间会太短了一些呀
顶部
wsll[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76794
精华 0
积分 423
帖子 505
信誉分 100
可用分 3393
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
4

发表于 2014-6-14 11:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 tangxin_80 于 2014-6-14 11:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

如果是BIO-RED转膜仪的话，用衡压15v，转60分钟，效果很好。你试一下

你好，我想问你一下你的转移缓冲液的配方是什么呀，我缓冲液里面加了200ml甲醇，0.45%浓度的sds，不知道sds的作用是什么，为什么很多配方sds用量都不一样呀
顶部
feima+[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77651
精华 0
积分 424
帖子 547
信誉分 100
可用分 3561
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
5

发表于 2014-6-14 11:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

SDS 有人认为是可以协助大分子量蛋白转膜。但也可以不加sds的，效果好像没改变。
顶部
mamamiya[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72974
精华 0
积分 653
帖子 986
信誉分 100
可用分 5763
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
6

发表于 2014-6-14 11:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是BIO-RED转膜仪的话，应注意以下问题：
1 膜的大小有影响，一般膜大一些的电流按0.6mA/cm2,小膜0.8mA/CM2
2 滤纸的大小一定不要大过胶和膜，膜比胶稍小一点
3 转移缓冲液就是你上边说得加SDS那种，SDS会增加你的转膜效率
4 如果你用的是PVDF膜，使用前先用甲醇泡一下，5s
5 转膜时间一般在2小时左右
6 滤纸最好为公司的专用滤纸，如没有的话，滤纸要厚一些
祝你好运！！！！
顶部
H2O[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77273
精华 0
积分 434
帖子 547
信誉分 100
可用分 3566
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
7

发表于 2014-6-14 11:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的条件：
普通转移buffer 加10％甲醇（也可不加）
Bio-RAD 湿转 350mA。 1.5h
PVDF 膜
顶部
one[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73393
精华 0
积分 697
帖子 1114
信誉分 100
可用分 6353
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-22
状态 离线
8

发表于 2014-6-14 11:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

30KD电白质应该很好转
转移缓冲液： 称3.02g tris ，14.4g Glycine，定容到800ml，加200ml甲醇，最后定容到1000ml，用于转移。
转移是滤纸3层以上（普通滤纸也可以），膜、胶、滤纸可以剪成一样大小，并用泡沫夹紧。
转移用恒压，电压25V，一小时就可以了。
转移后可以用丽春红S染色，确认是否转移到膜上。
缓冲液可以不加SDS，转移时注意温度，不要太高。
顶部
mod=8048[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73531
精华 0
积分 307
帖子 294
信誉分 100
可用分 2306
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
9

发表于 2014-6-14 11:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是伯乐转膜仪
转移缓冲液加20%甲醇
转膜和分子量大小关系不大，主要看膜的面积，PVDF膜，一般我们使用恒流350 ma 70min or 恒压100v 90 min,转移时注意温度，加冰块降温。
转移后可以用丽春红S染色，确认是否转移到膜上。
顶部