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标题:【求助】转膜时间？

101010[使用道具]
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发表于 2014-6-14 11:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】转膜时间？


请问各位有经验的战友，western-blot中，我的目的蛋白是32KDa，如果恒流250mA，那么转膜的时间大概多少比较合适？
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-6-14 11:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

咱们的目的蛋白差不多大
我一般恒压50v
转过几次，感觉膜的大小决定转膜时间
3cm*6cm的膜有2个半小时就能转得比较好了
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发表于 2014-6-14 11:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
两快膜同时转电流要加倍吗？感觉好象要，如果是恒压感觉好象不变，不知道我的感觉对吗？ 膜越大时间越长吗？
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-6-14 11:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也做过两块膜同时转的
当时我还是用的恒压50V
转移了3.5h
就我做过的6，7此经验来说比较大的膜肯定需要长一些的时间
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发表于 2014-6-14 11:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是湿转， 我们常用25V，2h,效果很好。如果是干转10min, 祝你成功
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avi317[使用道具]
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发表于 2014-6-14 11:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
转膜时间与你蛋白的分子量有关，分子量大时间相对较长。一般45V 1.5~6h,具体情况看分子量大小，摸过几次就可以找到最佳时间点，祝成功
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莲花白[使用道具]
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发表于 2014-6-14 11:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的目的蛋白是3oKDa.跟你的差不多。你现在做出来了没？我刚开始做WB，BIARAD的仪器。请问转膜条件？
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