【求助】SDS电泳问题

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标题:【求助】SDS电泳问题

qqshepherd[使用道具]
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发表于 2014-6-14 15:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位战友，小弟最近在分离的一个蛋白分子量大约300KD，我用SDS-PAGE（8％）的分离胶检测，大分子蛋白都聚集在分离胶顶端了，与我的预想也一样，这样是没办法区分200KD以上的大分子蛋白的，不知各位战友有没有更好的办法（最好是电泳）能够很好的区分高分子蛋白呢，或者其他检测大分子蛋白的方法也可以推荐，由于没有尝试利用更低的分离胶（6％），但我想结果也不会很好，希望能得到大家的帮助！小弟第一贴就是求助贴，希望斑竹大人们多多包涵！谢谢大家！

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发表于 2014-6-14 15:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也想知道，现在要分离的蛋白大约220kd

tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-6-14 15:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1，不知你是要检测还是分离制备300KD蛋白？
2，可以参考上层析仪用分子量排阻层析。

kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-6-14 15:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你好，请先参考蛋白电泳技术那本书。从我做的实践和书上看，SDS上200KD后的蛋白质分离比较困难。（我用过7%的胶，200以上的几乎不怎么分离），不过对于300KD的蛋白质可尝试用PAGE来分离，5%的胶体分范围为60-700KDa你可以试一下。

kuaizige[使用道具]
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发表于 2014-6-14 15:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

再说一点，胶的交联度C=5%时，胶体浓度5%才能分离60-700的范围。C=2.6%时不行。

qqshepherd[使用道具]
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发表于 2014-6-14 15:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1，不知你是要检测还是分离制备300KD蛋白？
2，可以参考上层析仪用分子量排阻层析。

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　　我的最终目的是分离300KD的蛋白了，但是细胞培养后需要对此蛋白进行检测，由于有与之分子量较为接近的蛋白存在（200KD以上），所以利用凝胶过滤层析分析纯度似乎有些不妥．
　　非常感谢你的建议！