【求助】为何测定蛋白质浓度

蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】为何测定蛋白质浓度

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】为何测定蛋白质浓度

u234[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态离线

发表于 2014-6-14 16:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

比如做蛋白电泳的时候，测定蛋白浓度，意义何在？

2541[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 75124
精华 0
积分 742
帖子 1144
信誉分 100
可用分 6580
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态离线

发表于 2014-6-14 16:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我想上样量的大小直接干扰检测结果。国家规定检测的上样量好像是5微克。过低会造成纯度高的假相。

damingxia0904[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 76226
精华 1
积分 285
帖子 246
信誉分 102
可用分 2011
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态离线

发表于 2014-6-14 16:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白浓度的测定是电泳上样量的一个参考，上样量过低检测不到，过高可能过载，造成脱尾。
作western时我们也常常根据经验估计也不常测浓度。
但如果总蛋白量差异过大，虽然有内标，但内标差异大，图会很不好看，并且误差增大，结果可能并不一定可靠。

04906[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 73544
精华 0
积分 599
帖子 858
信誉分 100
可用分 5155
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态离线

发表于 2014-6-14 16:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

看一下上样量不同的差别吧
200微克样品和四百微克样品

附件

2014-6-14 16:01

10022185.snap.jpg (34.06 KB)

loli[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 71788
精华 0
积分 736
帖子 1171
信誉分 100
可用分 6650
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-31
状态离线

发表于 2014-6-14 16:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

测定蛋白浓度即对蛋白进行定量,这样你才能决定你上样量多少.

小糖块[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 76231
精华 0
积分 259
帖子 258
信誉分 100
可用分 2056
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态离线

发表于 2014-6-14 16:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

测定的蛋白浓度是总的蛋白浓度。测定蛋白浓度的目的是
1，在总蛋白量一致的条件下，比较你的目的蛋白，这样可以说明不同处理组间的差别。
2，就像其他朋友建议的那样，决定上样量。

dog002[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态离线

发表于 2014-6-14 16:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1.在总蛋白量一致的条件下，只有比较你的目的蛋白，这样可以找出你需要的差异蛋白质来得到你干兴趣的蛋白质分析及你以后的质谱分析，功能蛋白质组学分析。
2.目前你所做的应该在定量蛋白质组学下开展的比较蛋白质组学的工作，如果发现新蛋白质的话你可以往后面的功能结构走，
3.定量蛋白质的量很重要，而且你如果不定量的话，没办法找到差异或者你人为的假阳性差异蛋白。
4.也就是上面说的要对你的图谱分析，量的多少很关键，是要做那些蛋白质，量够做生物质谱或者其他质谱检测吗？这个就很关键了，所以你还是要定量很重要，建议你还是双向电泳参考使用说明吧。这个网上很多。