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标题:【求助】蛋白如何浓缩提高浓度?

龙小好汉[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白如何浓缩提高浓度?


浓缩的问题，你可以尝试加适量的葡聚糖凝胶颗粒到你的蛋白溶液。一般来讲，葡聚糖凝胶颗粒只是吸收水分，而蛋白质分子不能够进入到颗粒里面。经过离心你可以收集上清，理论上便得到了你想要得浓缩后的高浓度的蛋白溶液
我看到有位朋友着呢们写?可行吗?急等.
请高手指点一下.
我的蛋白用1%SDS溶解,用这种方法可行吗？
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yes4[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有卖现成的1.5ml超滤离心管，一次可以上500ul样品，通常12000转离心30min，再反过来离10min就行了，通常浓缩到只剩几十微升。前提要有高速离心机。
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龙小好汉[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我不需要很彻底的浓缩.只要浓度能达到20微克/微升就可以了
我有个问题,我们实验室有低温离心机,转速可以达到那么多,我不明白的是怎么反过来离?还是只有这种特定似的离心机才可以?离心的时候温度需要控制在多少?
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KGZ564[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以用PEG浓缩，如果不是要求定量很准确的话，直接把样品放到截留分子量比较小的透析袋里面，埋在PEG20000的固体里面，大概半个小时就可以了
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ending[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以用TCA法沉淀,不过这样蛋白会变性.如果想保持活性,我觉得还是冷冻干燥法比较好,前提是你有冷冻干燥机.
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yychen[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用超滤离心管浓缩时，离心速度不应过大3000rpm就足够了，一次时间也不应过长，不然容易堵塞，影响超滤离心管重复利用的效果。PEG20000的效果不错，冷冻干燥法可能影响蛋白质的构像。－－－我们实验室的经验，不知对否。呵呵
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qiangren789[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是很纯的蛋白建议用冷冻干燥，冷冻干燥也不一定要很彻底的，只要在你的样品大概还剩下你想要得到的量的时候停下来就好了，不过干燥之前一定要标记好，在离心管的所得样品量处标记好。要是做的话具体的步骤可以问我的，呵呵。
根据你的蛋白的实际情况吧，要是不纯，就用盐析等方法先提纯。
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是新手，什么都不懂，愁死了
看到你说冻干，我也遇到同样的样品蛋白质浓度过低的情况，准备用冻干方法。可是刚才在论坛上看了好多关于冻干的东西还有一个专门冻干的论坛呢，看得云里雾里的。原来冻干也这么复杂啊！！
我想请教你，冻干后用ELISA方法检测和用WESTERN方法，会不会因为冻干蛋白质变性什么的影响结果？
我看还有一种方法叫做TCA（用三氯醋酸和丙酮）浓缩蛋白质，电泳做WESTERN，这种方法跟冻干浓缩有什么区别？
还有就是蛋白质变性其免疫原性有没有什么改变？
我做的是阴道冲洗液样品，蛋白含量低，做过预实验了，很低，想提高浓度！
谢谢你了！
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用离子交换柱浓缩，1ml的高载量的填料，可以吸附130mg蛋白，然后用盐溶液洗脱，速度慢一点，可以搜集到很浓的蛋白液，注射器操作就可以了。
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
在层析系统中用离交柱浓缩如果速度比较慢，死体积是一个很大的干扰因素，冻干蛋白就怕会变性失活。在层析系统中用离交柱浓缩如果速度比较慢，死体积是一个很大的干扰因素，冻干蛋白就怕会变性失活。
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