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标题:【求助】我用 western-blot 检测不到脑组织中的IL-1B,TNF-a

youreyes[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】我用 western-blot 检测不到脑组织中的IL-1B,TNF-a


我用 western-blot 检测脑组织中的IL-1B，TNF-a,两种抗体都是chemicon公司的，都是rabbit anti-rat,上样量已加至100ug,但怎么也做不出来。有人做这个的吗？分子量只有是十几，用PVDF转膜时间要缩短吗？我现在用的350mA,2小时。是不是还有其他原因啊？谢谢！
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wawa[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是，你的蛋白浓度是多少？怎么可能上那么高？
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youreyes[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的蛋白浓度大约10 ug/ul,我上样时用10ul蛋白加10ul 2*loading bueffer
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发表于 2014-6-14 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也是，你的蛋白浓度是多少？怎么可能上那么高？
你用多大浓度的胶啊？是不是细胞因子用western 很难检测出来啊？
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misswu61[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也用SANTA 的IL-1B的抗体也没有做出来。也很郁闷。
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youreyes[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的抗体是新买的，好贵啊，也可用来做ELISA,但导师说我ELISA做起来比较烦，就让我做western ,可怎么也做 不出来，好象很多人做细胞因子的western 效果都不好。今天我准备换个15%的分离胶做了试试看，原来一直用10%的。
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misswu61[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我今天用santa的抗体将IL-1B做出来了（单抗1：200），蛋白浓度也不高，2点多。我觉得是你的抗体有问题。或者是别的问题。
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youreyes[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
能把你的蛋白量，胶浓度，电泳，转膜条件说一下吗？谢谢
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ii077345[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
能把你的蛋白量，胶浓度，电泳，转膜条件说一下吗？谢谢
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