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标题:【求助】蛋白质样品如何浓缩？

hulu呼噜[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白质样品如何浓缩？


我提取脑组织蛋白样品浓度有点低，请问怎么浓缩比较好？谢谢！
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panda王[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用冻干仪，保持低温，进行浓缩。
真空干燥温度过高，蛋白易降解
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hulu呼噜[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢。请问这样处理对后续WESTERN BLOT有没有影响？
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caihong[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

样品置于透析袋中，外面撒聚乙二醇20000，可达到浓缩效果，并注意控制低温。应该对WESTERN BLOT没有影响。
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tuuu2[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

透析法（配合聚乙二醇）的确有经济效率又高。但存在蛋白被修饰的问题。
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toy[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以用TCA方法浓缩，或者丙酮等浓缩，硫酸铵沉淀。TCA的一个好处是可以去处一些杂质，对Western没有影响的。可以参考：cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3365549_1.html')
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changlhsyo[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

常用的蛋白浓缩方法如下：
1 硫酸铵沉淀法
2 有机溶剂沉淀法（丙酮，乙醇）
3 聚乙二醇沉淀法
4 超滤法
5 透析法
6 冷冻干燥法
如果样品的量比较多，采用前3种方法较为经济实用。
样品量较少可以采用后3种方法，较为适宜，其中透析法，简单方便，至于超滤吗，这种方法很好，我们做过，效果不错，就是仪器贵了点，millipore的超滤仪将近3万，呵呵。还有那种millipore 的那种小的离心管也可以用于浓缩，或分离，据说也不便宜。冷冻干燥方法也不错，有条件的话，不失为一种蛋白浓缩的好方法，活性保持的较好。
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
相对来说超滤比较快，比较温和， 且能除掉一些小分子的杂质。但超滤膜的孔径和材料要选好。
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

硫酸铵沉淀，透析和超虑方法我都用过！硫酸铵沉淀后得脱盐，透析方法不错，但我觉得如果条件允许，超虑最好，可以出去很多杂志，起到一定的分离春还左右作用!millipore的超虑管很好用，不过像楼上说的，孔径和材料一定选好，孔径太大会丢失你的目的蛋白。不过有了超虑管，不需要超虑仪，普通的离心机就ok了1!
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发表于 2014-6-14 16:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

millipore的比较好用，上网能查到在各大城市的代理商电话。如果样品比较少，用超滤离心管，选好孔径就可以了；如果样品比较多，用超滤膜或膜包，样品一定要先用0.45um的微孔滤膜过滤，否则很容易堵的
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