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标题:【求助】蛋白质含量测定问题

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发表于 2014-6-14 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白质含量测定问题


哪位老师做过考马斯亮蓝法测蛋白质含量，我想问一下染料和蛋白质结合成复合物时都有生么现象，因为我做的实验中两种物质结合会产生悬浮物，慢慢就会沉淀，所以测的吸光值很不稳定不知道是什么原因，恳请各位老师指导！
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68943512yao[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

两种物质结合后会生成一种蓝颜色的络合物，蛋白浓度越高，颜色越深。正常情况下两者结合后不会产生悬浮物或者沉淀。配好的考马斯亮蓝溶液在低温放置时容易产生沉淀，使用前最好过滤。
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发表于 2014-6-14 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
应该是根据浓度的增加程渐进的蓝色增加,以测定蛋白的浓度,考液4度放置1个月都没问题,是不是你的蛋白本事的问题呢,提取的纯度怎么样啊.
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star#room[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

两种物质结合后会生成一种蓝颜色的络合物，蛋白浓度越高，颜色越深。是不是你的蛋白质有问题？或者蛋白质中还有某种杂质中和染色液中磷酸的成分，就会使考马斯亮蓝析出或者产生絮状沉淀
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remenb[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

和 你的 样品处理有关系，这种测定蛋白质的方法受到很多离子的影响，具体记不清，自己查书去！
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IAM007[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我测的是标准曲线，考马斯亮蓝和牛血清白蛋白都是刚买的样品
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orangecake[使用道具]
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发表于 2014-6-14 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果你的样品中含有SDS，那么可能会造成不好的影响，我以前含SDS的样品用的是lorry法，效果还不错。
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