【求助】帮我看一下2D图

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标题:【求助】帮我看一下2D图

sistis[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位，帮我看看2D图，找找原因。上样量少了，点就少，多了就有横条纹，聚焦不好。还有就是这种连续的横纹。

附件

2014-6-14 17:30

77428834.jpg (19.24 KB)

zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

2-DE出现横纹原因一般有以下几种：
1、蛋白未充分溶解
2、加入样品的pH过低（在酸性末端出现这种情况）
3、干扰物质存在，非蛋白杂质在样品中能干扰等电聚焦，在最后的结果中产生水平条纹
4、样品中存在离子去污剂
5、聚焦不充分
6、聚焦过度（>100，000Vh）
7、如果是水平条带横贯凝胶，可能是因为在琼脂糖覆盖层中或平衡液中很有杂质

sistis[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #2 zhenxin 的帖子

非常感谢，不过有没有什么具体的原因，针对我的这几块的。

zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

第一张胶可能是干扰物质的存在，因为非蛋白杂质在样品中能干扰等电聚焦，会产生水平条纹。可以用丙酮沉淀或用clean-up试剂盒解决这个问题。
第二张胶中间扭曲的部分，可能是因为SDS-PAGE胶没有完全聚合，聚合速度过快或在灌胶时渗漏而使其不均匀造成的。样品中盐离子过多也会干扰聚焦。
第三张胶还可以
最后一张图蛋白集中在酸性端，可能是因为加入的样品pH过低，可以加入一些碱性IPG缓冲液；聚焦也很不充分。
据我的经验，在实际操作中，一般出现横纹大多数是因为样品制备和聚焦不好两个原因。尤其是样品制备非常重要，保证需要的蛋白充分的溶解，干扰的物质尽量的去除。
祝好运！

sistis[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

酸性IPG缓冲液是什么？如何保证需要的蛋白充分溶解？